[發(fā)明專利]高血壓易感基因的rs2878677位點的檢測方法及檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010171050.8
• 申請日: 2010-05-11
• 公開（公告）號: CN101979657A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 溫紹君;李瑤;劉闊;李志忠;吳海;劉雅;謝毅;羅毅;劉潔琳;王佐廣;樓煜清;嚴山;文杰;牛秋麗;顧偉
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴;包兆宜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地，涉及人線粒體融合基因2(Mfn2?gene)的單核苷酸多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphism，SNP)位點rs2878677及其與原發(fā)性高血壓相關(guān)性的檢測。本發(fā)明還涉及檢測這個SNP位點的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

原發(fā)性高血壓(essential?hypertension，EH)是一種多因素、多基因疾病，由環(huán)境與遺傳因素共同致病的常見而多發(fā)的心血管病癥，對人類健康造成了極大的影響。隨著分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的高血壓相關(guān)基因已經(jīng)有150余種，但是EH的發(fā)病機制仍然不完全清楚，高血壓的早期診斷和預(yù)防問題仍然未能完全解決。EH是遺傳因子和環(huán)境共同作用的結(jié)果，血壓的變化30％-60％歸因于遺傳。由于環(huán)境因素是可以控制和確認的，而對高血壓遺傳學(xué)因素卻是固定不變的。因此，對可變因素的控制，如對高血壓危險因素的預(yù)防，可以在一定程度上延緩和防止高血壓的發(fā)病，但是對固定不變的遺傳因素的認識不足卻在一定程度上嚴重影響著對高血壓發(fā)病、診斷和治療。因此對高血壓遺傳學(xué)的研究十分必要(王佐廣，溫紹君，吳兆蘇.高血壓、易感基因與單核苷酸多態(tài)性[J].高血壓雜志，2001，9：259-264)。

近二十余年來，有關(guān)高血壓治療的研究更多地集中在對血壓的控制和對靶器官的保護，并已取得突飛猛進的發(fā)展。但是，這些手段并不能從根本上控制血壓，目前對人類內(nèi)源性抗高血壓基因的研究還很少，因此，研究內(nèi)源性抗高血壓機制是今后高血壓防治研究的主要方向之一，具有重要的研究價值和應(yīng)用前景，如果通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性抗高血壓機制治療高血壓病，將會促進我國生物醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，并為我國每年節(jié)省巨大的醫(yī)療費用。

目前所發(fā)現(xiàn)的高血壓相關(guān)基因，歸結(jié)起來可以概括為促高血壓基因和抗高血壓基因，Mfn2屬于后者。Mfn2的前身是我國學(xué)者陳光慧等[Chen?GH，Zhang?CH，Zhu?YQ，et?al.Expression?of?a?novel?gene?related?to?hypertension[J].Natl?Med?J?China，1997，77：823-828.]于1997年對培養(yǎng)的自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常Wistar?Kyoto(WKY)大鼠的血管平滑肌細胞進行差異顯示，克隆出一個新基因——增殖抑制基因(hyperplasia?suppressorgene，HSG)。它包含有4160bp的堿基對，共編碼661個氨基酸(NM_014874，GeneBank?AccessU41803)。后經(jīng)一系列體內(nèi)、體外實驗發(fā)現(xiàn)[Chen?KH，Guo?XM，Dalong?Ma，et?al.Dysregulationof?HSG?triggers?vascular?proliferative?disorders[J].Nature?Cell?Biol，2004，6，872-883.]，HSG可以明顯地抑制Ras-Raf蛋白-絲裂素活化蛋白激酶基因表達，并且可以激活抗癌基因的表達，有效地阻遏細胞周期和抑制多種細胞的增殖，且這種抑制作用是通過細胞凋亡的方式實現(xiàn)的。因此HSG基因是原發(fā)性高血壓的候選基因之一，后經(jīng)基因功能研究表明，HSG基因參與線粒體融合，因此正式命名為線粒體融合基因2(mitofusin?2，Mfn2)但是目前對Mfn2與EH的研究較少，沒有證實rs2878677與EH相關(guān)性的報道。

綜上所述，為了最終實現(xiàn)治療高血壓，本領(lǐng)域迫切需要尋求原發(fā)性高血壓易感基因，并開發(fā)檢測原發(fā)性高血壓易感基因的方法、試劑盒，以及相關(guān)的治療藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(包括早期診斷)高血壓易感基因的方法及檢測試劑盒。

本發(fā)明提供了一種高血壓易感性基因的檢測方法，即檢測Mfn2基因rs2878677位點的基因型，rs2878677帶有T基因型的個體高血壓的發(fā)病風險顯著高于普通人群。

所述的rs2878677，位于Mfn2的內(nèi)含子2中(片段重疊群contig：NT_021937.19位置8057996C/T)。脫氧核糖核酸(DNA)序列編號：rs2878677位置基于SEQ?ID?NO：1/6；引物1基于SEQ?ID?NO：2/6；引物2基于SEQ?ID?NO：3/6；探針1基于SEQ?ID?NO：4/6；探針2基于SEQ?ID?NO：5/6；擴增產(chǎn)物基于SEQ?ID?NO：6/6。

具體而言，該方法包括步驟：(a)抽提樣品的基因組DNA，擴增獲得Mfn2基因內(nèi)含子2；(b)檢測步驟(a)產(chǎn)物中單核苷酸多態(tài)性位點rs2878677的基因型。