[發明專利]誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基

無效

• 申請號: 201010169604.0
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN101851601A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 張允剛
• 申請（專利權）人: 江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

技術領域

本發明涉及大蒜組織培養技術，具體是一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基。特別適用于利用從大蒜胚性懸浮培養系轉固體培養后體細胞胚(簡稱體胚)的誘導。

背景技術

大蒜(Allium?sativumL.)是無性繁殖植物，具有較高的食用及藥用價值，利用生物工程技術改良其品質.抗病蟲性等性狀現已引起廣泛的重視，這些生物技術應用的關鍵環節是建立一個大蒜細胞組織培養、增殖的有效植株再生體系。懸浮培養技術可以在短時間內培養出大量同質的試驗材料，大幅度提高試驗效率，為大蒜生物工程提供理想的試驗材料。張毅等利用大蒜懸浮培養提取大蒜次生代謝物質有過報道(1993)；但利用大蒜懸浮培養技術，建立懸浮培養系及有效植株高頻率再生體系尚未報道。

發明內容

本發明的目的是解決大蒜懸浮培養系轉管固體培養上增殖培養時體胚難誘導的技術難題，提供一種大蒜胚性懸浮培養系體胚誘導用的培養基。

本發明的技術方案如下：一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基，是將6-芐基嘌呤6-BA、激動素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養基B5中，調整PH值至5.8-6.0制成；其各組份的用量為：以1L基本培養基B5加入量計：

B5??????1L

6-BA????5mg

KT??????1mg

NAA?????0.01mg

蔗糖????30g

瓊脂????6g。

上述原料中，B5為基本培養基，提供培養組織生長發育所需的無機營養元素和部分有機營養元素；6-BA、KT、NAA是植物生長調節劑，具有促進培養物愈傷組織形成和發育的作用；蔗糖提供培養組織生長發育所的碳素營養；瓊脂的主要作用是固化培養基，起支撐作用。

上述各組份的用量是發明人在理論分析的基礎上進行大量試驗摸索總結得出的，按上述比例配制培養基，具有促使大蒜胚性懸浮培養系形成體細胞胚的效果。

上述培養基的制作方法是將6-BA、KT、NAA、蔗糖溶解于B5，攪拌均勻，PH值調整為5.8-6.0之間即可。

本發明的積極效果是：克服了大蒜懸浮培養難以成系、體細胞胚(簡稱體胚)難誘導的難題，利用本培養基可以使大蒜胚性懸浮培養系高頻率誘導出體胚。

具體實施方式：

以下通過實施例和對照例進一步闡述本發明的有益效果：

對照例1：

B5????????1L

2，4-D????0.5mg

6-BA??????0.5mg

NAA???????0.2mg

蔗糖??????30g

瓊脂??????6g

對照例2：

B5????????1L

2，4-D????0.5mg

KT????????0.1mg

NAA???????0.2mg

蔗糖??????30g

瓊脂??????6g

實施例1：

B5?????1L

6-BA???5mg

KT?????1mg

NAA????0.01mg

蔗糖????30g

瓊脂????6g

試驗方法及結果：

將上述實施例的培養基用于大蒜胚性懸浮培養系轉固體培養后體胚的誘導試驗：

材料：大蒜徐州白蒜莖尖分生組織懸浮培養誘導出的胚性愈傷組織。

方法：將大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織經懸浮培養后，將誘導出的胚性懸浮系轉移到裝有上述固體培養20ml(PH5.5)的三角瓶中，培養條件為27±1℃，每日12h.1000lx光照。

結果：將大蒜懸浮培養系中3mm以上細胞團轉管接種在上述三種培養基上，進行愈傷組織的增殖和體胚的進一步發育誘導。經過4周的繼代培養，接種在對照例1培養基上的胚性愈傷組織顏色逐漸由淡黃色變為灰白色，組織增殖速度變快，結構變利疏松，喪失胚性發育能力。接種在對照例2培養基上的胚性細胞團只有10％的細胞團保持亮黃色，維持其胚性；90％的細胞團喪失了胚性。接種在本實施例1培養基上的細胞團89％仍表現為亮黃色.結構致密.有光澤.生長緩慢，并且逐漸有瘤狀突起，經細胞學觀察，這時期體胚的發育逐漸成熟。由此可見高比例的細胞分裂素/生長素有利于體胚的成熟，2，4-D的存在不利于體胚的成熟分化，大蒜胚胎發生對生長素濃度的要求極低。

綜合以上分析，得出大蒜胚性懸浮系體胚誘導的最佳培養基為：

B5????1L

6-BA??5mg