[發(fā)明專利]具有平端和3’修飾的干擾RNA雙鏈體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010167832.4
• 申請(qǐng)日: 2004-08-27
• 公開（公告）號(hào): CN101914533A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·魏勒;J·哈爾;J-C·博洛格納;F·J-C·納特;R·黑納
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾瓦提斯公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00;A61P31/00;A61P31/12;A61P35/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2004年8月27日的、發(fā)明名稱為“具有平端和3’修飾的干擾RNA雙鏈體”的中國(guó)專利申請(qǐng)200480024980.3(PCT/EP2004/009599)的分案申請(qǐng)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用雙鏈RNA對(duì)靶基因選擇性抑制并提供了對(duì)此目的有用的化合物。

發(fā)明背景

研究表明短RNA雙鏈體是在許多體外和體內(nèi)模型中介導(dǎo)RNA干擾的有效引導(dǎo)(Hamilton等人，1999，Zamore等人，2000，Caplen等人，2001，Elbashir等人，2001，Yang等人，2000)。

最通常的情況是將合成的siRNA雙鏈體設(shè)計(jì)成例如兩側(cè)與每條鏈3’末端的2-3個(gè)不配對(duì)核苷酸(“突出端”)相連的19個(gè)相連核糖核苷酸堿基對(duì)的一段序列。發(fā)現(xiàn)此21nt的siRNA種類在哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物系統(tǒng)內(nèi)DICER介導(dǎo)的長(zhǎng)雙鏈RNA切割過程中產(chǎn)生(Bernstein等人，2001，Ketting等人，2001)。此特定21mer?siRNA模式最初是從黑腹果蠅(drosophilamelanogaster)模型中選擇出來(lái)的并且后來(lái)由于其功效而受到重視(Elbashir等人，2001)。因此，當(dāng)今運(yùn)用siRNA作為基因抑制物的研究依賴于這種“野生型”21mer?siRNA的衍生物。突出端通常使用2’脫氧核苷酸，這尤其是因?yàn)槌杀镜脑颍⑶乙才c抗細(xì)胞內(nèi)核酸酶活性的潛在保護(hù)作用有關(guān)。

目前，本發(fā)明提供了雙鏈RNA(“dsRNA”)介導(dǎo)RNAi的新的創(chuàng)造性的模式。根據(jù)本發(fā)明的平端siRNA克服了目前本領(lǐng)域所使用的具有3’突出端的合成siRNA的缺點(diǎn)。

發(fā)明簡(jiǎn)述

本發(fā)明提供了帶有至少一個(gè)平端的雙鏈RNA，其中所述的雙鏈RNA?介導(dǎo)RNA干擾，并且其中所述的平端包含至少一個(gè)下式的3’末端：

其中

X為O或S；

R₁和R₂獨(dú)立地為OH、NH₂、SH、烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，其中烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基可由另外的雜原子和官能團(tuán)取代，優(yōu)選地由選自N、O或S的雜原子或選自O(shè)H、NH₂、SH、羧酸或酯的官能團(tuán)取代；

同樣，R₁和R₂可為式Y(jié)-Z，其中Y為O、N、S并且Z為H、烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，其中烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基可由另外的雜原子取代，優(yōu)選地由選自N、O或S的雜原子取代。

發(fā)明詳述

本發(fā)明基于這樣一個(gè)令人吃驚的發(fā)現(xiàn)，具有至少一個(gè)包含特定類型化學(xué)修飾平端的合成雙鏈RNA(dsRNA)分子有效介導(dǎo)RNA干擾。由于其簡(jiǎn)化了合成步驟(例如使用通用固體載體)，根據(jù)本發(fā)明的dsRNA對(duì)使用siRNA的高通量方法尤其有用。

在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有至少一個(gè)平端的雙鏈RNA，其中所述的雙鏈RNA介導(dǎo)RNA干擾，并且其中所述的平端包含至少一個(gè)下式的3’末端：

其中

X為O或S；

R₁和R₂獨(dú)立地為OH、NH₂、SH、烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，其中烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基可由另外的雜原子和官能團(tuán)取代，優(yōu)選地由選自N、O或S的雜原子或選自O(shè)H、NH₂、SH、羧酸或酯的官能團(tuán)取代；

同樣，R₁和R₂可為式Y(jié)-Z，其中Y為O、N、S并且Z為H、烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，其中烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基可由另外的雜原子取代，優(yōu)選地由選自N、O或S的雜原子取代；

R₁和R₂也可形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，例如碳環(huán)或雜環(huán)，環(huán)結(jié)構(gòu)優(yōu)選地具有3-7個(gè)原子數(shù)。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z為一個(gè)或多個(gè)無(wú)堿基核苷部分，優(yōu)選為核糖核苷部分。核苷部分可通過例如磷酸二酯基或硫代磷酸酯基連接。