[發(fā)明專利]一種白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010166712.2 | 申請日： | 2010-05-10 |
| 公開（公告）號： | CN102242104A | 公開（公告）日： | 2011-11-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 薛百忠;張妍;王宏英;薛雁;李小軍;溫麗麗;王寒 | 申請（專利權(quán)）人： | 遼寧諾康醫(yī)藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/64 | 分類號： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責任公司 21001 | 代理人： | 張晨 |
| 地址： | 110000 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蝮蛇 蛇毒 凝血酶 提取 方法 | ||
1.一種白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：在常溫下，從白眉蝮蛇蛇毒中提取單一成份類凝血酶的步驟為：
(1)白眉蝮蛇蛇毒用緩沖液浸泡、溶解過夜，離心去除沉淀，得到蛇毒上清液；
(2)蛇毒上清液經(jīng)SP?Sepharose?Fast?Flow陽離子交換層析，上樣結(jié)束后，用pH6.0的PBS緩沖溶液I進行洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，至讀數(shù)達到基線后，再用pH6.0含0.2M?NaCL的PBS緩沖溶液II直線洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，收集活性峰，得到類凝血酶粗提液；
(3)類凝血酶粗提液用pH8.0的PBS緩沖溶液III透析；
(4)透析后的樣品經(jīng)M-Aminothenyltrotionic?Acid-Agarose親和層析，上樣結(jié)束后，用pH8.0的PBS緩沖溶液III進行洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，至讀數(shù)達到基線后，再用梯度混合儀進行梯度洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，收集掛柱峰，得到單一組分的類凝血酶；
2.按照權(quán)利要求1所述白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：所述步驟(1)中的緩沖溶液是pH6.0的PBS緩沖溶液I。
3.按照權(quán)利要求1所述白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：所述步驟(2)中SP?Sepharose?Fast?Flow陽離子交換層析柱所選擇的流速為3.0mL/min。
4.按照權(quán)利要求1所述白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：所述步驟(3)中類凝血酶粗提液需用pH8.0的PBS緩沖溶液III透析至少三次，使類凝血酶粗提液接近pH8.0。
5.按照權(quán)利要求1所述白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：所述步驟(4)中采用梯度混合儀進行梯度洗脫，梯度混合儀的前槽為50mm的NaH2PO4溶液IV，梯度混合儀的后槽為pH8.0的PBS緩沖溶液III，15個柱體積，梯度洗脫。
6.按照權(quán)利要求1所述白眉蝮蛇蛇毒類凝血酶的提取方法，其特征在于：所述步驟(4)中M-Aminothenyltrotionic?Acid-Agarose親和層析柱所選擇的流速為1.5mL/min。
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