[發明專利]一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法

無效

• 申請號: 201010165329.5
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號: CN101865919A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 支援;孟謹;顧鳴;韓奕奕;沈鶴柏
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/52;G01N33/533
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟包括：

(1)向待測樣品中加入免疫化超順磁納米粒子，15～35℃混合反應10～60min，使免疫化超順磁納米粒子與阪崎腸桿菌發生特異性結合；

(2)在外加磁場吸引作用下，收集免疫化超順磁納米粒子，洗滌后加入免疫化熒光量子點，15～35℃混合反應10～60min，使之與載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌發生特異性結合；

(3)利用外加磁場作用吸附收集載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免疫化熒光量子點結合物，洗滌后定性或定量熒光檢測；

所述免疫化超順磁納米粒子為以四氧化三鐵納米粒子為內核，以二氧化硅為外殼，表面偶聯特異性抗體的磁性粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體；

所述的免疫化熒光量子點為與聯特異性抗體連接的量子點，所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體。

2.權利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述免疫化超順磁納米粒子的制備方法包括：

(i)將包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子分散在有機溶劑中，與N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲基硅烷反應，得到表面氨基化的磁性納米粒子；N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲基硅烷與包裹二氧化硅的四氧化三鐵納米粒子比例為0.05～0.1ml/g；

(ii)將表面氨基化的磁性納米粒子分散于pH?7.25～7.5、并且戊二醛質量濃度為1％～2％的磷酸緩沖液中，將特異性抗體與步驟(i)所得表面氨基化的磁性納米粒子偶聯，得到免疫化超順磁納米粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體；

所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌多克隆抗體的重量比為1∶(0.004～0.04)；

所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌單克隆抗體的重量比為1∶(0.001～0.02)。

3.權利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述免疫化熒光量子點的制備方法包括如下步驟：

(A)將pH?7.25～7.5、含有10～50mg/ml交聯劑的磷酸緩沖液的與表面修飾有羧基的量子點混合，反應5～20min以活化羧基；

(B)加入保護劑反應20～60min；

(C)加入特異性抗體混合，反應0.5～4hr，除去未反應的特異性抗體，收集免疫化熒光量子點；

所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體；

所述抗阪崎腸桿菌多克隆抗體與量子點的比例為1∶(4×10⁵～4×10⁶)mmol/mg；

所述抗阪崎腸桿菌單克隆抗體與量子點的比例為1∶(1×10⁵～2×10⁶)mmol/mg。

4.權利要求2所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(i)所述的包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子粒徑為50nm至150nm。

5.權利要求3所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(A)所述的交聯劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽，濃度為10～50mg/ml。

6.權利要求3一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(B)所述的保護劑為N-羥基硫代琥珀酰亞胺。

7.權利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(2)和(3)所述的外加磁場為2000～6500Gs。