[發(fā)明專利]一種磺胺藥抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010165173.0
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN101955536A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈建忠;江海洋;吳小平;王戰(zhàn)輝;李杰超;徐飛;劉丹;王照鵬;王進(jìn);王世恩;李艷偉;李娜;溫凱
• 申請（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;G01N33/566;G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種磺胺藥抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

磺胺類藥(Sulfonamides)，是通過人工合成的氨苯磺胺衍生物，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病。代表藥物有：磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基異惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹惡啉等。磺胺類藥物能抑制革蘭氏陽性菌及一些陰性菌，可以治療多種細(xì)菌感染，在獸醫(yī)臨床上廣泛應(yīng)用于治療由敏感細(xì)菌感染的各種畜禽疾病。

由于磺胺類藥物在體內(nèi)的作用和代謝時間較長，通過任何途徑攝入的磺胺都有可能在人體內(nèi)蓄積。蓄積濃度超過一定值時，就會對人體造成損害。短時間大劑量或長時間小劑量的刺激可分別引起急性或慢性中毒，影響機(jī)體的泌尿、免疫系統(tǒng)，破壞肌肉、腎臟和甲狀腺等組織，如誘發(fā)人的甲狀腺癌等。另外，人體內(nèi)長期存在磺胺會導(dǎo)致許多細(xì)菌對磺胺類藥物產(chǎn)生抗藥性。因此，國際食品法典委員會(CAC)和許多國家規(guī)定，食品中磺胺類總量的最大殘留限量(MRL)為0.1mg/kg。酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-linked?Immunoadsorbent?Assay，簡稱ELISA)是將抗體抗原反應(yīng)的高度特異性、敏感性與酶的高度催化性有機(jī)地結(jié)合，在不同的載物上進(jìn)行有毒物質(zhì)殘留分析的方法。

目前，用于免疫檢測的抗體都是單克隆抗體或多克隆抗體。單克隆抗體或多克隆抗體的制備必須通過細(xì)胞培養(yǎng)獲得，整個生產(chǎn)過程復(fù)雜，消耗時間長，費(fèi)用高，且不易進(jìn)行操作。單鏈抗體是將抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因通過一個短肽鏈連接后融合表達(dá)出來的抗體片斷，具有分子量小、特異性高、結(jié)合力強(qiáng)、易于利用基因工程技術(shù)操作等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種檢測磺胺藥的單鏈抗體及其編碼基因。

本發(fā)明所提供的單鏈抗體，由重鏈可變區(qū)、連接重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的短肽、輕鏈可變區(qū)依次連接組成，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如序列1自N末端起第1-118位氨基酸殘基所示，所述輕鏈可變區(qū)的的氨基酸序列如序列1自N末端起第134-248位氨基酸殘基所示。

上述單鏈抗體中，所述連接重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的短肽的氨基酸序列如序列1自N末端起第119-133位氨基酸殘基所示。

所述編碼基因?yàn)槿缦?)、2)、3)、4)或5)所示：

1)所述重鏈可變區(qū)的編碼基因?yàn)樽孕蛄斜碇行蛄?的5′末端起第1-354位核苷酸所示的DNA分子；

2)所述輕鏈可變區(qū)的編碼基因?yàn)樽孕蛄斜碇行蛄?的5′末端起第400-744位核苷酸所示的DNA分子；

3)所述連接重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的短肽的編碼基因?yàn)樽孕蛄斜碇行蛄?的5′末端起第355-399位核苷酸所示的DNA分子；

4)序列表中序列2所示的DNA分子；

5)在嚴(yán)格條件下與1)、2)或3)或4)限定的DNA序列雜交且具有相同功能的DNA分子。

含有上述任一所述編碼基因的重組載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和表達(dá)盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

上述任一所述單鏈抗體在檢測磺胺藥物中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所述磺胺藥物為如下中的至少一種：磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧噠嗪和磺胺對甲氧嘧啶。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測磺胺藥的免疫試劑盒。

本發(fā)明所提供的檢測磺胺藥的免疫試劑盒，為下述1)、2)、3)或4)中任一所述試劑盒：

1)試劑盒中包括磺胺藥半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、上述任一所述單鏈抗體和酶標(biāo)記抗抗體；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；

2)試劑盒中包括磺胺藥半抗原的酶標(biāo)記物、上述任一所述單鏈抗體和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；

3)試劑盒中包括磺胺藥半抗原的酶標(biāo)記物、上述任一所述單鏈抗體；其中，所述單鏈抗體作為包被原；

4)試劑盒中包括磺胺藥半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、上述任一2所述單鏈抗體的酶標(biāo)記物；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原。

上述任一所述免疫試劑盒中，所述試劑盒中包括磺胺藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液、洗滌液和樣品濃縮液；所述磺胺藥標(biāo)準(zhǔn)品為磺胺二甲基嘧啶；

所述磺胺藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液為如下各濃度的溶液0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L和40.5μg/L；

每1升所述洗滌液是按照如下方法配制得到的：將10ml吐溫20，5g疊氮化鈉和990ml磷酸鹽緩沖液混合，得到所述洗滌液；所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.005M-0.015M，具體為0.01M，pH值為7.2-7.6，具體為7.4；