[發明專利]野野村放線菌發酵生產A40926的發酵培養基以及發酵方法

有效

• 申請號: 201010164616.4
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號: CN102234675A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: 陳少欣;王巖;沈曉放
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;朱水平

技術領域

本發明屬于工業微生物技術領域，特別涉及一種新的野野村放線菌發酵生產抗生素A40926的發酵培養基以及相應的發酵方法。

背景技術

1984年，科學家在培養分離自土壤的馬杜拉(Actinomadura)品系菌時發現了抗生素A40926。并于1984年6月8日將菌株保藏于美國組織培養物保藏中心(American?Tissue?Culture?Collection，ATCC)，編號ATCC39727。該品系最初被認為屬于鏈霉菌屬，后經進一步研究，特別是對細胞壁合成的研究，在2003年，將其產生菌歸類于野野村放線菌屬(Nonomuraea.sp)。A40926屬于萬古霉素類抗生素，具有結合酰基-D-丙胺酰基-D-丙氨酸的能力。對革蘭氏陽性菌以及淋病奈瑟球菌(Neisseria?gonorrhoeae)具有較好的抗菌效果，且具有較長的半衰期。

達巴萬星是以A40926為前體的半合成糖肽類抗生素。達巴萬星最先是由Vicuron公司開發研究，目前正處于III期臨床試驗。達巴萬星對革蘭氏陽性菌具有很好的抗菌活性，其作用機制同萬古霉素和替考拉寧相同，主要用于治療由革蘭氏陽性菌引起的復雜性皮膚、軟組織感染。但其更強的生物活性和更長的半衰期使其具有更誘人的開發前景。隨著耐藥菌的不斷出現，而具有良好抗MRSA和VRE作用的抗生素卻開發緩慢。因此，達巴萬星的出現給臨床治療耐藥菌帶來了新的希望和突破，而其前體A40926的微生物發酵工藝也倍受業內人士的矚目。目前，A40926主要由意大利的VicuronPharmaceuticals制藥公司通過發酵進行生產，但其報道的發酵配方僅為一些簡單的無機鹽培養基，培養溫度為28℃，培養時間160h。由于其發酵培養基種的營養成分僅為一些簡單的無機鹽，菌體活力較差，發酵單位較低，其報道的最高發酵單位為128mg/L，而目前國內外的新的發酵工藝未見有報道。

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題就是針對現有的利用野野村放線菌發酵生產抗生素A40926發酵單位低的不足，提供一種新的用于野野村放線菌發酵生產抗生素A40926的發酵培養基以及相應的發酵方法，其可以大大提高A40926的發酵單位，提高生產效率。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案之一是：一種用于野野村放線菌(Nonomuraea.sp)發酵生產抗生素A40926的發酵培養基，包括碳源和氮源，其中，所述的碳源是有機碳源，含量是5-180g/L，所述的氮源是有機氮源，含量是2-210g/L，所述的含量按培養基的總體積計。

在本發明的發酵培養基中，所述的有機碳源包括培養基中常用的各種有機碳源，較佳的為選自葡萄糖、麥芽糊精、玉米淀粉和可溶性淀粉中的一種或多種，更佳的是葡萄糖和選自麥芽糊精、玉米淀粉和可溶性淀粉中的至少一種的混合物。有機碳源的用量5-180g/L，優選15-100g/L。其中葡萄糖較優的范圍為5-20g/L，麥芽糊精較優的范圍為10-80g/L，玉米淀粉較優的范圍為10-60g/L，可溶性淀粉較優的范圍為5-20g/L。

在本發明的發酵培養基中，所述的有機氮源包括培養基中常用的各種有機氮源，較佳的為選自黃豆餅粉、棉籽餅粉、蛋白胨和酵母浸膏(粉)中的一種或多種。所述的黃豆餅粉較佳的可以選自熱榨黃豆餅粉和/或冷榨黃豆餅粉。所述蛋白胨較佳的是大豆蛋白胨、胰蛋白胨和肉蛋白胨中的一種或多種。所述的酵母浸膏(粉)是采用新鮮酵母乳液經自溶、酶解、分離、濃縮等技術精制而成的一種可溶性膏狀或粉狀純天然制品。所述的有機氮源更佳的是選自黃豆餅粉、棉籽餅粉和蛋白胨中的至少一種和選自酵母浸粉和酵母浸膏中的至少一種的混合物。有機氮源的用量為2-210g/L，優選30-50g/L。其中熱榨黃豆餅粉較優的范圍為5-40g/L，冷榨黃豆餅粉較優的范圍為5-40g/L，棉籽餅粉較優的范圍為5-30g/L，大豆蛋白胨較優的范圍為2-20g/L，胰蛋白胨較優的范圍為2-20g/L，肉蛋白胨較優的范圍為2-20g/L，酵母浸粉較優的范圍為5-100g/L，酵母浸膏較優的范圍為5-100g/L。

本發明的發酵培養基中，如常規的野野村放線菌的發酵培養基一樣，較佳的還進一步包含氨基酸。所述的氨基酸優選纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸中的一種或多種，最佳的是纈氨酸。氨基酸的用量為0.5-3.0g/L，較優的范圍為1.0-2.5g/L。

在本發明的發酵培養基中，較佳的還進一步包含金屬離子。所述的金屬離子優選銅離子、鎂離子和亞鐵離子中的一種或多種。金屬離子的用量為0.05ppm-12.0ppm，較優的范圍為0.5-10.0ppm。