[發明專利]抑制鋅指蛋白ZBTB20的miRNA或其前體的應用

無效

• 申請號: 201010164601.8
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號: CN102234687A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: 楊淑偉;張佩玲
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113;A61K48/00;A61P1/16;A61P35/00;A61P35/02;G01N21/64
• 代理公司: 上海大邦律師事務所 31252
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種抑制鋅指蛋白ZBTB20的miRNA或其前體的應用。

背景技術

鋅指蛋白作為轉錄調控因子活躍在基因調控領域，參與細胞發育、代謝等調控，與許多發育、代謝疾病及癌癥發生息息相關。根據形成鋅指結構域保守序列的不同，鋅指蛋白主要分為Cys2His2、Cys4和Cys6三個亞型。其中，近幾年發現的ZBTB20(Zinc?finger?and?BTBdomain-containing?protein?20)，屬于經典Cys2His2型鋅指蛋白分類下POK(含有BTB/POZdomain)蛋白家族，最初由德國cDNA聯盟發現并克隆(GeneBank，accession?numberAL050276)。2000年N.Tommerup等運用核放射及熒光原位雜交法將ZBTB20基因定位到3號染色體q13.2帶上。ZBTB20與BCL-6高度同源，可能參與造血、癌癥發生及免疫反應。利用ZBTB20基因敲除小鼠進行ZBTB20功能研究，發現ZBTB20作為一個關鍵的轉錄抑制子調節肝臟中甲胎蛋白AFP(肝癌重要指標之一)的表達。

microRNA(miRNA)是非編碼小RNAs的一種，編碼miRNA的基因首先由RNA聚合酶II轉錄生成初級轉錄本(pri-miRNA)，其發夾結構可被RNA酶III?Drosha識別并剪切成為約70個核苷酸長度的發夾狀前體miRNA(pre-miRNA)。前體miRNA在Exportin5的作用下從細胞核轉運至細胞質中，再由另一種RNA酶11I?Dicer加工處理成為長約22個核苷酸的成熟miRNA。

先前的研究均表明miRNA作為一種新的基因表達調控因子，能夠通過序列特異性結合于靶基因mRNA的3’非翻譯區(3’un-translated?region，3’UTR)來負調控靶基因的表達，廣泛參與機體內多種生理、病理過程。miRNA通過直接剪切mRNA或抑制mRNA翻譯在轉錄后水平調節基因表達。miRNA的異常表達與惡性腫瘤發生發展過程密切相關，這一事實使越來越多的研究人員著眼于對腫瘤相關miRNA的篩選、靶基因的確定和具體作用機制的研究。預測的miRNA對其靶基因是否存在真正的調控作用還有待實驗方法來證實。熒光報告載體實驗是目前驗證miRNA靶基因的常用方法，即將含有目的miRNA結合位點的靶基因mRNA?3’UTR片段克隆插人熒光素酶(luciferase)編碼區的下游，構建熒光報告載體，有的學者用EGFP代替熒光素酶構建熒光報告分子，然后采用Western?Blot的方法來檢測熒光蛋白表達情況。

人類基因組總共表達約700個左右的miRNA，而鋅指蛋白目前發現的Cys2His2型有700多個，假設miRNA作為一種上游的調控因子調控鋅指蛋白的表達進而調控更廣范圍的基因的表達。但是，到目前為止，還沒有出現抑制調控鋅指蛋白ZBTB20表達的miRNA的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種抑制鋅指蛋白ZBTB20的miRNA或其前體的應用，可以作為診斷造血系統疾病如肝癌的分子標志物，同時可開發為miRNA小分子藥物。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一個方面，提供了一種miRNA或其前體的用途，用于作為診斷造血系統疾病的分子標志物，所述miRNA或其前體包含選自SEQ?ID?NO：1～7中的序列。

由于有證據顯示ZBTB20是肝癌指標蛋白甲胎蛋白AFP的有效轉錄抑制子，肝癌病人血中甲胎蛋白含量明顯升高，很可能是由于ZBTB20量的減少或其活性降低造成，本發明的miRNA或其前體與ZBTB20能發生特異結合，進而對ZBTB20進行上游抑制調控。因此，可以將本發明的miRNA或其前體作為診斷造血系統疾病的分子標志物，通過檢測該miRNA或其前體的異常表達來診斷造血系統疾病。

在本發明的另一方面，還提供了一種miRNA或其前體的用途，用于制備治療造血系統疾病的藥物，所述miRNA或其前體包含選自SEQ?ID?NO：1～7中的序列。所述藥物可以施用于因miRNA異常表達引起鋅指蛋白ZBTB20調節失控、進而產生的造血系統疾病如肝癌、白血病、或淋巴瘤等。

優選的，所述miRNA選自SEQ?ID?NO：1～7中的序列，更優選的，所述miRNA選自SEQ?IDNO：1～2中的序列。

優選的，所述miRNA前體選自SEQ?ID?NO：8～11中的序列，更優選的，所述miRNA前體為SEQID?NO：8所示序列。