[發明專利]用于檢測細胞遷移的瓊脂糖凝膠微流動腔裝置

無效

• 申請號: 201010164032.7
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN101858844A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 熊新
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: G01N11/10
• 分類號: G01N11/10;C12M1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物芯片領域，尤其涉及用于檢測細胞遷移的瓊脂糖凝膠微流動腔裝置。

背景技術

細胞遷移在眾多生理、病理程中扮演著重要的角色。傳統的細胞遷移檢測裝置有Boyden小室和Transwell小室，其技術方案為：Boyden小室和Transwell小室為一種小盒裝置，盒中以一片3～5μm孔徑的微孔濾膜將盒分為上、下兩小室，上室加受檢細胞的懸液；下室加趨化因子，置37℃溫育數小時，上室中的細胞因受下室內趨化因子的誘導，使細胞由濾膜微孔進入濾膜內，最后取濾膜，經固定、干燥、著染、脫色等步驟，將處理后的濾膜置顯微鏡下對細胞進行計數。但是，Boyden小室和Transwell小室存在濃度梯度不穩定及難以實現實時監測活細胞遷移的缺點。

Shing-Yi?Cheng在A?hydrogel-based?microfluidic?device?for?thestudies?of?directed?cell?migration(J)lab?on?chip，2007，7：763-769公開了一款瓊脂糖凝膠微流動腔裝置，其技術方案為：用光刻法將三條平行的通道印制在瓊脂糖凝膠表面，微通道末端為儲液池，將印制了通道的凝膠夾持于兩塊透明平板之間形成一個“三明治”結構。該裝置通過在儲液池兩端加入不同濃度的液體產業濃度梯度來誘導細胞遷移。但是，此裝置采用非鍵合方式導致其密封性差，時常發生漏液是導致實驗失敗。另外，該裝置也不能通過微注射泵來調節其液體流速。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠產生穩定濃度梯度的細胞遷移檢測裝置，并實現實時監測遷移結果，為實現該目的，本發明的技術方案如下：

用于檢測細胞遷移的瓊脂糖凝膠微流動腔裝置，具體由以下結構組成：口字型有機玻璃框(1)及墊在所述口字型有機玻璃框下的一塊載玻片(2)，所述口字型有機玻璃框(1)內灌注有厚度為0.5～1cm、寬度為2～3cm、長度為4～6cm的瓊脂糖凝膠(3)；三條處于同一凝膠深度的平行微通道貫穿于所述瓊脂糖凝膠(3)內，其中位于兩側的第一通道(4)和第三通道(5)孔徑為100～500μm，位于中間的第二通道(6)孔徑為1mm；所述口字型有機玻璃框(1)的兩側壁鑿有與所述微通道(4)(5)(6)相連通的導入口(7)和導出口(8)；進液管(9)插入所述瓊脂糖凝膠(3)中，通過導入口(7)與第一通道(4)、第三通道(5)連通；出液管(10)插入所述瓊脂糖凝膠(3)中，通過導出口(8)與第一通道(4)、第三通道(5)連通。

進一步，所述進液管(9)的游離端同雙道微注射泵連接；所述出液管(10)的游離端同廢液管相連；

進一步，所述微通道之間的水平距離為2～5mm。

本發明的有益效果為：本裝置能快速產生穩定的濃度梯度，且密封性好，能通過連接微注射泵來實現流速控制，并進一步通過流速來控制濃度梯度達到平衡的時間。本裝置能夠對活細胞進行實時監測，為僅通過染色、計數來判斷細胞遷移提供了新思路，并為細胞遷移的后續試驗(如血管內皮細胞遷移的后續試驗為血管生成)提供了新平臺。

附圖說明

圖1為瓊脂糖凝膠微流控裝置制作步驟中的排布微絲示意圖；

圖2為瓊脂糖凝膠微流控裝置的結構示意圖；

圖3為無口字型有機玻璃框存在的瓊脂糖凝膠與通道的結構示意圖；

圖4在為流速為50μl/min時，三處通道的濃度梯度(灰度值)分析圖；

圖5為血管內皮細胞遷移前、后的照片(20倍顯微鏡下)，圖A為遷移前的照片，圖B為遷移后的照片，箭頭所指方向代表濃度梯度方向。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將參照附圖，對本發明的優選實施例進行詳細的描述。

實施例

1.1主要材料

人內皮細胞株EA.hy926，購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心；DMEM?F₁₂培養基，購自Invitrogen公司(美國)；胎牛血清，購自杭州四季青公司；趨化因子；瓊脂糖凝膠，購自Advancebiomatrx公司(美國)。

1.2細胞培養

細胞貼壁生長于含10％胎牛血清中，在37℃，5％CO₂培養箱中培養。

1.3微流控裝置的制作