[發明專利]胎兒常見染色體異常診斷試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201010163449.1
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN101825639A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 邊旭明;蔣宇林
• 申請（專利權）人: 北京中誠晶創醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/76;G01N33/533;G01N33/96
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 劉立國

1.胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：所述試劑盒包括：

全血干血片濾紙；

標準品血片及質控品血片；

復溶洗脫緩沖液；

血清學檢測試劑。

2.如權利要求1所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：所述的血清學檢測試劑為：

1)抗AFP-Eu示蹤劑，該示蹤劑為銪標記的AFP?IgG；

2)抗freeβHCG-Sm示蹤劑，該示蹤劑為釤標記的freeβHCG?IgG；

上述標記的IgG將通過抗原抗體反應與待測標本中的AFP與freeβHCG結合，并在標記有固相AFP/freeβHCG抗體表面形成免疫復合物，每個樣本的Eu和Sm熒光強度分別與樣品中的AFP和游離βHCG含量成正比例關系。

3.如權利要求1所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：所述的血清學檢測試劑為抗AFP和hAFP/Free-β-HCG示蹤劑及檢測洗脫緩沖液。

4.如權利要求1～3任一項所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：所述的復溶洗脫緩沖液為pH為7.2～7.6的0.01～0.03M的Na₂HPO4-KH₂PO4緩沖液體系。

5.如權利要求4所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：還包括增強液，所述的增強液為含有TritonX-100，乙酸和螯合劑的復合溶液。

6.如權利要求5所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒，其特征是：所述的增強液為β萘甲酰三氟丙酮1.995mg；三辛基氧化膦9.840mg，Triton?X-1000.5mL，鄰苯二甲酸氫鉀0.695g，冰醋酸2.95mL，溶于500mL水，調pH至3.2，4℃避光保存。

7.一種胎兒常見染色體異常診斷試劑盒的制備方法，包括：

AFP或/和HCG標準品血片及質控品血片的制備；

打孔及洗脫；

血清學檢測；

結果計算。

8.如權利要求7所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒的制備方法，其特征為：所述的AFP或/和HCG標準品血片及質控品血片的制備包括

1)采集男性健康志愿者靜脈血40～50ml，所述靜脈血的血清AFP≤2ug/l；

2)4℃1000rpm/min離心15分鐘，棄上清液，加入等量PBS溶液，充分混勻，重復離心洗滌步驟三次；

3)取制備完成的濃縮洗滌紅細胞與試劑標準品溶液等量混合。檢測混合液紅細胞壓積45％左右，將此混合液滴至濾紙片上，自然晾干，獲得標準血片濃度分別為0，0.5，5，50，250，500U/ml；

4)將制備好的標準干血片4℃冰箱保存；

5)質控干血片的制備同標準血片，取濃縮洗滌紅細胞與質控品等量混合制備而成。

9.如權利要求7所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒的制備方法，其特征為：所述的打孔及洗脫包括用專用打孔鉗在血片相同部位打下直徑6mm標準品、質控品和樣本血片放入相應的微孔中，加入100ul專用洗脫緩沖液，室溫下慢速震蕩1h洗脫。

10.如權利要求7所述的胎兒常見染色體異常診斷試劑盒的制備方法，其特征為：所述的血清學檢測包括

1)Free?βHCG的檢測

1.1將抗Free?βHCG示蹤劑貯存液按比例稀釋；

1.2在96微孔板中分別加入200ul示蹤劑稀釋液及25ul標準品或待測品；

1.325～30℃慢速震蕩2.5小時；

1.4洗板4～6次；

1.5在多孔板中加入200ul增強液，慢速震蕩5分鐘；

1.6Wallac?DELFIA系統根據標準品運行標準曲線，計算待測品濃度；

2)AFP的檢測

2.1在96微孔板中分別加入200ul專用洗脫液及25ul標準品或待測品，慢速震蕩1h；

2.2洗板2次；

2.3在微孔中加入200ul抗AFP示蹤劑稀釋液；

2.4室溫下靜置1h；

2.5洗板6次；

2.6在96孔板中加入200ul增強液，慢速震蕩5分鐘；

2.7Wallac?DELFIA系統根據標準品運行標準曲線，計算待測品濃度。