[發明專利]微生物發酵生產低溫淀粉酶的方法有效
| 申請號： | 201010162660.1 | 申請日： | 2010-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN102093990A | 公開（公告）日： | 2011-06-15 |
| 發明（設計）人： | 張慶芳;遲乃玉;王鑫 | 申請（專利權）人： | 大連大學 |
| 主分類號： | C12N9/24 | 分類號： | C12N9/24 |
| 代理公司： | 大連智慧專利事務所 21215 | 代理人： | 周志艦 |
| 地址： | 116622 遼寧省*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微生物 發酵 生產 低溫 淀粉酶 方法 | ||
1.一種微生物發酵生產低溫淀粉酶的方法，其包括以下步驟：
(1)將產生淀粉酶的微生物逐級低溫馴化，馴化溫度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃，使其在低溫環境中生長良好；
(2)按常規方法將篩選出的淀粉酶產生菌在14～20℃逐級擴大培養，制備成液體一級種子和二級種子；
(3)將液體一級種子或二級種子，按發酵液體積的2～8％接種量接入產酶培養基中，在14～20℃培養48～144h時，即微生物發酵生產低溫淀粉酶結束；
(4)將(3)的發酵液在4,000～8,000rpm離心收集液體，收集到的液體即為粗酶液；
(5)根據不同需要和使用對象不同，將(4)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。
2.根據權利要求1所述的方法，其中菌種低溫馴化培養基、液體種子培養基、產酶培養基分別為：
(1)菌種低溫馴化培養基：淀粉10.0～20.0g，蛋白胨10.0～20.0g，NaCl?7.0～12.0g，瓊脂20.0g，蒸餾水1.0L，pH值7.0～7.6，121℃高壓蒸氣滅菌30min。
(2)液體種子培養基：淀粉5.0～8.0g，牛肉膏2.0～4.0g，NaCl?5.0～8.0g，K2SO4?0.8～1.2g，CaCl2?0.1～0.2g，ZnSO4·7H2O?1.2mg，MnSO4·H2O?1.6mg，蒸餾水1.0L，pH值7.0～7.6，121℃高壓蒸氣火菌30min。
(3)產酶培養基：淀粉12.0～15.0g，牛肉膏3.0～6.0g，NaCl?14.0～20.0g，K2SO4?2.0～4.0g，CaCl2?0.1～0.2g，ZnSO4·7H2O?1.2mg，MnSO4·H2O?1.6mg，蒸餾水1.0L，pH值7.0～7.6，121℃高壓蒸氣滅菌30min。
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