[發明專利]小鼠Miwi啟動子,其載體及應用

無效

• 申請號: 201010162278.0
• 申請日: 2010-04-27
• 公開（公告）號: CN101864419A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 周榮家;程漢華;侯宇
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

技術領域

本發明涉及基因表達調控領域，更具體地說，本發明涉及一種在小鼠雄性生殖細胞中特異表達的小鼠基因啟動子。

背景技術

Argonaute蛋白質家族的成員包含PAZ(Piwi?Argonaut?and?Zwille)和PIWI兩個結構域。Argonaute蛋白通過其PAZ結構域與小RNA的3’端發生作用，通過PIWI結構域與小RNA的5’端相互作用(Song?JJ，et?al.The?crystalstructure?of?the?Argonaute2?PAZ?domain?reveals?an?RNA?binding?motif?inRNAi?effector?complexes.Nat?Struct?Biol，2003，10：1026-1032；Yan?KS，et?al.Structure?and?conserved?RNA?binding?of?the?PAZ?domain.Nature，2003，426：468-474；Song?JJ，et?al.Crystal?structure?of?Argonaute?andits?implications?for?RISC?slicer?activity.Science，2004，305：1434-1437；Takada?S，Rivas?FV，et?al.Purified?Argonaute2?and?an?siRNA?formrecombinant?human?RISC.Nat?Struct?Mol?Biol，2005，12：340-349)。并在小RNA的指導下尋找目標位點，從而引起基因沉默。根據Argonaute蛋白家族氨基酸序列相似性，Ago/Piwi家族可分為三個亞家族。第一，Argonautes(Ago)亞家族；第二，Piwi蛋白亞家族；第三個亞家族包括線蟲中的Sago-1和Sago-2。

小鼠Piwi亞家族的成員包括MIWI，MI?LI/PIWIL2和MIWI2/PIWIL4，小鼠Miwi、Mili和Miwi2都是雄性生殖細胞發育過程中特異表達的基因，但其表達時間有所不同。Miwi從減數分裂時期的粗線期精母細胞開始表達持續到圓形精子細胞時期；Mili從原始生殖細胞遷入生殖嵴后不久即胚胎期12.5天左右開始表達，一直持續到圓形精子細胞時期；相對于Miwi和Mili來說，Miwi2的表達時期很短，只在胚胎期15.5天到出生后3天的精原細胞中表達。Piwi亞家族都能與一類小RNA結合，稱為piRNA，在粗線期與Miwi和Mili相互作用的piRNA稱為粗線期piRNA，在粗線期之前與Mili相互作用的piRNA稱為前粗線期piRNA。

Satomi?Kuramochi-Miyagawa等人在2001年最早克隆到小鼠Miwi基因，并對其表達譜進行了研究，發現Miwi只在小鼠睪丸組織中有表達，原位雜交顯示其表達位于減數分裂的粗線期(Kuramochi-Miyagawa?S，et?al.Two?mousepiwi-related?genes：miwi?and?mili.Mech?Dev，2001，108：121-133)。2002年，Wei?Deng，Haifan?Lin等人也對小鼠Miwi基因進行了克隆和表達分析，他們克隆到4.06kb的小鼠Miwi基因cDNA，包括191bp的5’UTR區，2.59kb的開放讀碼框，和1.17kb的3’UTR區，并通過原位雜交和Miwi-GFP?Knockin小鼠發現：MiwiRNA最早出現于出生后12天(12dpp)，即偶線期精母細胞開始出現的時候，并在出生后14天(14dpp)開始大量出現。其表達一直持續到圓形精子細胞時期(Deng?W，et?al.miwi，a?murine?homolog?of?piwi，encodes?acytoplasmic?protein?essential?for?spermatogenesis.Dev?Cell，2002，2：819-830)。在Miwi基因Knockout的小鼠中，其精子發生被阻滯在圓形精子細胞期，同時不能生成長型精子細胞。

然而尚沒有關于Miwi基因組織特異性表達轉錄調控機制的研究。

始于20世紀80年代初的轉基因動物技術，是指通過重組DNA技術，將外源基因導入動物體內，外源基因穩定整合在染色體基因組上并傳給下一代。用這種方法可建立轉基因動物模型以研究外源基因在整體動物中的表達調控規律；可改變動物基因型使其表現型更符合人類需要，也可用轉基因動物生產人類所需的生物活性物質。