[發明專利]一種棘胸蛙微衛星DNA標記Ⅰ及其用途

無效

• 申請號: 201010162048.4
• 申請日: 2008-10-23
• 公開（公告）號: CN101805732A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 鄭榮泉;葉容暉;楊光;成斌
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明是申請日為2008.10.23、申請號為200810121952.3的《一種棘胸蛙微衛星DNA 標記及其用途》的分案申請。

技術領域

本發明涉及分子標記技術，具體涉及一種棘胸蛙的DNA分子遺傳標記及其用途。

背景技術

微衛星(又稱為簡單重復序列，SSR)是由1-6個核苷酸組成的短序列串聯重復多次 而組成的一段DNA。由于微衛星側翼序列相對保守，根據其側翼序列設計引物，可用PCR 擴增出微衛星位點的序列。由于微衛星中重復單元的重復次數不同，因而擴增出的微衛星 序列的長度呈現多態性。微衛星序列廣泛存在于真核生物基因組中，而且隨機分布，具有 高度多態性，選擇上中性，共顯性等特點，是十分有效的遺傳標記，被廣泛應用于遺傳圖 譜構建、基因定位、遺傳關系分析、品種鑒定等領域。如用微衛星標記分析苧麻品種的親 緣關系(Zhou等，2005，Progress?in?Natural?Science，15：137-142)、用微衛星DNA標記 進行豬品種分類的專利申請“適于豬品種分類的豬微衛星DNA標記”(公開號CN 1370834A)、用微衛星DNA標記進行家蠶分子連鎖遺傳分析的專利申請“家蠶的SSR標 記及其應用”(公開號CN?1970792A)。

棘胸蛙(Paa?spinosa?David)，屬兩棲綱、無尾目、蛙科。棘胸蛙個體大，肉質細嫩潔 白，味道鮮美，具有很高的營養價值和藥用價值，素有“百蛙之王”的美稱。由于人為捕 殺和自然環境的惡化，野生棘胸蛙資源遭到嚴重破壞，開展棘胸蛙人工養殖既有助于保護 野生資源，又能滿足市場需求?，F在，棘胸蛙是我國重要的養殖蛙類之一，但是由于其基 礎研究薄弱，要實現規模養殖還有許多亟待解決的問題，其中包括需要一套有效的分子標 記對其進行遺傳關系分析、種質資源調查、標記輔助育種等。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種棘胸蛙微衛星DNA標記I，利用該分子標記能對 棘胸蛙進行遺傳分析、種質資源調查和輔助育種。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種棘胸蛙微衛星DNA標記I，該微衛星DNA標 記I的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：2，該微衛星編號為Psp17。

作為本發明的棘胸蛙微衛星DNA標記I的改進：所述棘胸蛙微衛星DNA標記I引物為下 列引物對，其中的核苷酸序列為5′→3′，

Psp?17????正向：AGTTATGTGGCAGAGAAAC

反向：AAGAGCACAGGAGAGTCA。

本發明還同時提供了上述棘胸蛙微衛星DNA標記I的用途：用于對棘胸蛙進行遺傳分 析、種質資源調查或輔助育種。

實現上述發明的技術方案包括棘胸蛙(CA)n微衛星富集文庫的構建、含微衛星序列 的陽性克隆的篩選及測序，確定了8個多態性豐富的微衛星標記Psp16、Psp17、Psp18、 Psp19、Psp20、Psp21、Psp22、Psp23。

本發明旨在分離克隆微衛星DNA標記，建立棘胸蛙的微衛星DNA的技術體系并利用這 些分子標記進行遺傳分析、種質資源調查和輔助育種。因此，本發明提供了8個棘胸蛙微 衛星位點的DNA序列及擴增上述8個棘胸蛙微衛星位點的引物序列和擴增方法，8個棘 胸蛙微衛星位點用于棘胸蛙種質資源研究，遺傳關系分析，標記輔助選種和標記輔助育種， 重復性好，多態性高，是一種可靠有效的分子標記。

附圖說明

下面結合附圖對本發明的具體實施方式作進一步詳細說明。

圖1是本發明涉及的13個棘胸蛙自然種群的structure聚類圖(K＝3)。

具體實施方式

實施例1、棘胸蛙(CA)_n微衛星富集文庫的構建

依次進行以下步驟：

1)、用經典的酚-氯仿抽提法提取棘胸蛙(廣西龍勝)基因組DNA。用限制性內切酶 Sau3AI酶切棘胸蛙基因組DNA，酶切產物在1.5％瓊脂糖凝膠上電泳，紫外光下切下 300-1000bp大小的DNA片段并用凝膠回收試劑盒純化回收酶切產物。