[發(fā)明專利]一種KRAS基因突變檢測液相芯片

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010160777.6
• 申請日: 2010-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN102234686A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許嘉森;李國強(qiáng);余剛;秦會(huì)娟
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州益善生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

1.一種KRAS基因突變檢測液相芯片，其特征是，主要包括有：

(A)針對(duì)KRAS基因的突變位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物對(duì)：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物組成，所述tag序列選自SEQ?ID?NO.109～SEQ?ID?NO.126中的序列；所述特異性引物是：針對(duì)Codon?12的、來源于SEQ?ID?NO.1或其反向互補(bǔ)序列中的堿基序列、和來源于SEQ?ID?NO.2～SEQ?IDNO.7中一條以上或其反向互補(bǔ)序列中一條以上的堿基序列；針對(duì)Codon?13的、來源于SEQ?IDNO.8或其反向互補(bǔ)序列中的堿基序列、和來源于SEQ?ID?NO.9～SEQ?ID?NO.14中一條以上或其反向互補(bǔ)序列中一條以上的堿基序列；和/或針對(duì)Codon?61的、來源于SEQ?ID?NO.15或其反向互補(bǔ)序列中的堿基序列、和來源于SEQ?ID?NO.16～SEQ?ID?NO.18中一條以上或其反向互補(bǔ)序列中一條以上的堿基序列；上述特異性引物的3’端的最后3位堿基中任一個(gè)堿基為突變位點(diǎn)，所述特異性引物的Tm值在52～58℃之間；

(B)分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti-tag序列選自SEQID?NO.127～SEQ?ID?NO.144中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)；

(C)用于擴(kuò)增出具有Codon?12、Codon13和/或Codon61的相應(yīng)突變位點(diǎn)的KRAS基因目標(biāo)序列的擴(kuò)增引物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的KRAS基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為：當(dāng)特異性引物來源于SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.14時(shí)，針對(duì)Codon?12和Codon13的擴(kuò)增引物為SEQ?ID?NO.145～SEQ?ID?NO.146；當(dāng)特異性引物來源于SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.14的反向互補(bǔ)序列SEQ?ID?NO.55-SEQ?ID?NO.68時(shí)，針對(duì)Codon?12和Codon13的擴(kuò)增引物為SEQ?IDNO.147～SEQ?ID?NO.148；針對(duì)Codon61的擴(kuò)增引物為SEQ?ID?NO.149～SEQ?ID?NO.150。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的KRAS基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述特異性引物為：針對(duì)Codon?12野生型的SEQ?ID?NO.19或SEQ?ID?NO.20，以及突變型中的G12R突變位點(diǎn)的SEQID?NO.21或SEQ?ID?NO.22、G12S突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.23或SEQ?ID?NO.24、G12C突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.25或SEQ?ID?NO.26、G12A突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.27或SEQ?ID?NO.28、G12D突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.29或SEQ?ID?NO.30、和/或G12V突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.31或SEQ?IDNO.32；和/或針對(duì)Codon?13野生型的SEQ?ID?NO.33或SEQ?ID?NO.34、以及突變型中的G13R突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.35或SEQ?ID?NO.36、G13S突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.37或SEQ?ID?NO.38、G13C突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.39或SEQ?ID?NO.40、G13A突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.41或SEQ?IDNO.42、G13D突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.43或SEQ?ID?NO.44、和/或G13V突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.45或SEQ?ID?NO.46；和/或針對(duì)Codon?61野生型的SEQ?ID?NO.47或SEQ?ID?NO.48，以及突變型中N61H突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.49或SEQ?ID?NO.50、N61L突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.51或SEQ?IDNO.52、和/或N61K突變位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.53或SEQ?ID?NO.54。