[發明專利]果蔗腋芽脫毒組培快繁方法

無效

• 申請號: 201010160577.0
• 申請日: 2010-04-23
• 公開（公告）號: CN101803574A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 陳仲華;劉睿;陳月桂;楊湛端;沈萬寬;譚嘉娜
• 申請（專利權）人: 廣州甘蔗糖業研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 唐弟

技術領域

本發明涉及甘蔗脫毒組培技術領域。

背景技術

甘蔗(含果蔗)宿根矮化病在中國主產蔗區及世界各地蔗區廣泛發生已有多年，導 致品種種性退化，嚴重影響甘蔗品質和產量。

獲得甘蔗無病毒(菌)植株的方法有多種，例如熱處理脫毒(菌)、莖尖培養脫毒(菌) 和愈傷組織培養脫毒以及組合方法。其中普遍采用的較好方法為莖尖培養脫毒(菌)法， 具體步驟是：通過蔗株頂端分生組織切取莖尖(0.2mm以下分生組織)、誘導產生幼芽、 長成小植株獲得脫毒苗。莖尖分生組織脫毒法存在的問題是：要切取很微小(0.2mm以 下)的莖尖分生組織，需在顯微鏡下操作，具有一定難度；而且，切取莖尖組織越小， 褐化率越高、成活率就越低，而切取莖尖組織偏大，又不能完全脫除病毒(菌)，同時容 易造成污染；因此，生產上迫切需要一種更好的方法來滿足甘蔗或果蔗脫毒(菌)組培 快繁的需要。

發明內容

本發明目的是提出一種果蔗脫毒組培快繁方法，以切取較大的果蔗植株腋芽為外植 體，先誘導腋芽萌動，再分化形成完整植株，其能夠在短期內而且較為容易獲得大量的 無病毒(菌)果蔗組培苗，克服莖尖分生組織脫毒(菌)法存在的操作難度大、成活率 低、生產成本偏高等問題。

本發明的目的通過以下技術方案來實現。

一種果蔗脫毒組培快繁的方法，其特征在于包括如下步驟：

1)植體的選取與滅菌：取果蔗的腋芽，經滅菌處理后，作為所用外植體；

2)腋芽誘導培養：將步驟1)處理后的腋芽在無菌條件下，摘取腋芽組織，接種在 腋芽誘導培養基上，誘導芽生成；

3)分化培養：將步驟2)形成的誘導芽移至分化培養基分化出叢芽；

4)增殖培養：將步驟3)分化形成的叢芽切成每2～3株為一組接在增殖培養基中， 再分化出叢芽；

5)生根培養：將步驟4)增殖形成的叢芽切成單株接種在生根培養基中進行生根培 養，生根組培苗生成；

6)移栽：當步驟5)的生根組培苗生長至3～5cm時，將生根組培苗移栽于移栽基質 培養至成苗；

7)病毒(菌)檢測：利用PCR技術對步驟5)的成苗進行RSD菌檢測。

其特征在于步驟3)中的分化培養基配方為：

MS+TDZ(0.001～0.01)mg/L+IBA(0.02～0.05)mg/L+蔗糖(30～40)g/L+精 氨酸(100～150)mg/L+肌醇(100～150)mg/L。

本發明具有如下突出的實質性特點和顯著進步：

1)本發明以果蔗腋芽為外植體，培養時，取材的體積較大(2～3mm)，接種操作容易， 成活率高達90％以上。

2)本發明采用的分化培養基配方，在分化培養過程中能快速使誘導芽分化出叢芽，采用 本發明繁殖果蔗脫毒苗速度快，月繁殖系數達5～10倍，適合于大規模工廠化生產。

附圖說明

圖1為本發明的實施例檢測結果(瓊脂糖凝膠電泳圖)。

檢測對照材料：以甘蔗宿根矮化病菌分離培養菌株、帶病菌植株為材料。(目的片段 約256bp)

圖片說明：1、15為DL2000，2為RSD菌株，3為清水對照，4為帶RSD菌果蔗植 株，5-14為隨機抽取的十株果蔗腋芽組培苗。

具體實施方式

通過以下實施例對本發明作進一步的詳細說明。

實施例1

一種果蔗脫毒組培快繁的方法，按如下步驟進行：

1)外植體的選取與滅菌：于7～11月，取果蔗的腋芽，經75％酒精浸泡0.5～1.0min， 再用0.1％汞溶液處理3～4min后，無菌水沖洗3～5次。

2)腋芽誘導培養：將步驟1)處理后的腋芽在無菌條件下，摘取2～3mm的腋芽，小心 去除葉鞘，接種在液態腋芽誘導培養基(MS+6-BA?0.5mg/L+IBA?0.02mg/L+ 活性炭1g/L+蔗糖30g/L+精氨酸100mg/L+肌醇100mg/L+瓊脂5g/L)的上，誘導 芽生成。

3)分化培養：將步驟2)誘導形成的誘導芽移至分化培養基(MS+TDZ?0.003mg/L+ IBA?0.02mg/L+蔗糖30g/L+精氨酸100mg/L+肌醇100mg/L+瓊脂5g/L)上誘導出 叢芽。