[發明專利]低分子量PEI-殼聚糖三重復合基因載體及制備方法和應用

無效

• 申請號: 201010160386.4
• 申請日: 2010-04-30
• 公開（公告）號: CN101845451A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 劉文廣;劉源;翟欣昀;孫鵬;徐軍;羅永峰
• 申請（專利權）人: 天津大學;廣州醫學院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;A61K47/42;A61K47/36
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 王小靜

1.一種RGD-硫酸軟骨素包覆PEI修飾殼聚糖三重復合基因載體，其特征在于它是由RGD多肽修飾硫酸軟骨素、pDNA和PE?I接枝殼聚糖組成，其中，PEI接枝殼聚糖、pDNA和RGD多肽修飾硫酸軟骨素質量比15∶1∶4。

2.根據權利要求1所述的復合載體，其特征在于所述的RGD為c(RGDfK)，氨基酸序列cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe-Lys)。

3.根據權利要求1所述的復合基因載體，其特征在于所述的殼聚糖分子量＝50kDa；PEI分子量＝800；PEI接枝率為27％。

4.一種權利要求1所述的復合基因載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)殼聚糖在NaOH溶液中浸泡過夜，倒掉上層堿液，加入異丙醇，然后加入過量的氯乙酸，常溫放置反應2h，然后在65℃下繼續反應3h，冷卻，將反應產物加水溶解，10000r/min下離心5min，棄掉不溶物，取上層溶液，加入過量無水乙醇沉淀出白色絮狀固體，濾取沉淀，加水溶解，反復溶解沉淀，至pH接近中性，沉淀放入烘箱干燥，得到羧甲基殼聚糖；

2)取羧甲基殼聚糖加水溶解，加入相當于殼聚糖單元摩爾數5倍的PEI，用38％的鹽酸調節PH值至5.0，并加入和羧甲基殼聚糖羧基等摩爾的NHS，室溫攪拌1h，取和羧甲基殼聚糖羧基等摩爾的EDC，加水溶解，緩慢滴加到上述溶液中，控制速率1h內滴完，室溫繼續反應24h，將反應液在去離子水中透析5天，凍干，得到PEI修飾殼聚糖；

3)取硫酸軟骨素加水溶解，加入相當于硫酸軟骨素上羧基摩爾數30％的RGD多肽，加入與RGD多肽等摩爾的EDC和NHS，室溫反應24h，反應液在超純水中透析5天備用，得到RGD多肽修飾的硫酸軟骨素溶液；

4)按照計量將pDNA和PEI修飾殼聚糖復合，復合30min后，將其加入到RGD修飾的硫酸軟骨素中，繼續復合20min，即可。

5.根據權利要求4所述的復合基因載體的制備方法，其特征在于所述的殼聚糖分子量為50KDa，PEI分子量為800。

6.根據權利要求4所述的復合基因載體的制備方法，其特征在于所述的透析袋截留分子量為3500。

7.權利要求1所述的復合基因載體的應用，其特征在于作為高效靶向非病毒基因載體。