[發明專利]溫敏型蛋白質分子印跡整體柱及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201010160311.6
• 申請日: 2010-04-30
• 公開（公告）號: CN101816927A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 張玉奎;秦磊;李文友;何錫文
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;C07K1/16
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 顏濟奎

1.一種溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征是，該方法包括如下步驟：

(a)將兩種硅烷化試劑加入到有機溶劑中，混合均勻；

(b)在(a)中加入硝酸作為催化劑，混合均勻；

(c)將(b)液體灌注到毛細管柱或高效液相色譜柱中，模具兩端密封，在40℃-50℃垂直放 置12-36小時；

(d)反應結束后，將毛細管柱或高效液相色譜柱分別接入到注射泵或高效液相色譜體系，用甲 醇沖洗柱體，制得毛細管硅膠整體柱骨架或高效液相色譜硅膠整體柱骨架；

(e)將功能單體與交聯劑溶于三羥甲基氨基甲烷-鹽酸Tris-HCl緩沖溶液中；

(f)在(e)通入氮氣除氧后加入模板分子；

(g)隨后在(f)中加入引發劑和加速劑，立即渦旋混合均勻；

(h)保持(g)在0-5℃，將緩沖溶液利用色譜泵淋洗(d)中已制備好的整體柱骨架，然后整 體柱骨架進行聚合反應；

(i)聚合反應結束后，用氯化鈉溶液洗脫整體柱骨架上的模板蛋白，然后用三羥甲基氨基甲烷- 鹽酸Tris-HCl緩沖溶液沖洗整體柱骨架至色譜基線平衡，就得到溫敏型蛋白質分子印跡整體柱；

步驟(e)所述的功能單體為N-異丙基丙烯酰胺NIPAAm、丙烯酰胺AAm或甲基丙烯酸MAA； 所述的交聯劑為N，N-亞甲基雙丙烯酰胺MBAA。

2.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(a)中所 述的硅烷化試劑是甲基三甲氧基硅烷，γ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷，四乙氧基硅烷，甲基三 乙氧基硅烷，或氨丙基三甲氧基硅烷；兩種硅烷化試劑之和與有機溶劑的體積比2∶1至4∶1，兩 種硅烷化試劑的體積比是1∶1-9∶1；所述的有機溶劑為甲醇或乙醇。

3.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(b)中所 述的催化劑硝酸的濃度為0.8mol/L-1.2mol/L；硅烷化試劑與催化劑的物質的量之比為4∶1。

4.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(e)所述 的功能單體為N-異丙基丙烯酰胺NIPAAm、丙烯酰胺AAm或甲基丙烯酸MAA；所述的交聯劑 為N，N-亞甲基雙丙烯酰胺MBAA；緩沖溶液中功能單體的重量濃度為8.00-10.57％，交聯劑的重 量濃度0.20-1.60％。

5.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(f)所述 的模板分子為溶菌酶lysozyme；模板分子于緩沖溶液中的重量濃度為2.30-5.00％，并在0-5℃下 緩慢振蕩4小時。

6.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(g)所述 的引發劑為過硫酸銨APS，加速劑為N，N，N′，N′-四甲基乙二胺TEMED；緩沖溶液中引發劑的重 量濃度為0.10-0.20％，加速劑的重量濃度為0.025-0.25％。

7.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(h)所述 的整體柱骨架放于25-38℃環境中聚合5-12小時。

8.根據權利要求1所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于，步驟(i)所述 的氯化鈉溶液的重量濃度為0.012-0.029％；三羥甲基氨基甲烷-鹽酸Tris-HCl緩沖溶液的pH為 7.00-8.00。

9.一種權利要求1-8中任一項方法制備的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱。

10.一種權利要求9所述的溫敏型蛋白質分子印跡整體柱的應用，用于選擇性分離模板蛋白質。