[發(fā)明專利]一種肉雞抗性評(píng)價(jià)的新方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010160215.1
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN101857892A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳國宏;劉艷;胡國順;欒德琴;龔琳琳;陳蓉;李碧春;王偉;侯慶文
• 申請（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06;G01N15/10;G01N33/50;G01N33/53
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種肉雞抗性評(píng)價(jià)的方法。

背景技術(shù)

家禽各種疾病的發(fā)生是難以避免的，而且逐年呈上升趨勢。現(xiàn)已有不少肉雞抗性評(píng)價(jià)的方法，但都沒有規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，難以達(dá)成一致。最重要的是單一的指標(biāo)不能全面的說明問題，況且不同人在不同時(shí)間在不同地點(diǎn)對不同群體用不同方法測定的一些抗性指標(biāo)也難以比較，難以參考，從而很難下定結(jié)論，進(jìn)一步影響了遺傳育種工作的開展以及養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。國內(nèi)對規(guī)范肉雞抗性指標(biāo)測定操作流程方面的研究還未見有報(bào)道。現(xiàn)有的方法只是片面的、就單個(gè)抗病指標(biāo)加以分析，缺乏全面性，我們通過查閱大量資料并加以一些相關(guān)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證，選取了6項(xiàng)主要的抗病指標(biāo)，互補(bǔ)其長短，以期達(dá)到全面、準(zhǔn)確的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種肉雞抗性評(píng)價(jià)的新方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：在選定的如皋雞群體的0周齡到12周齡期間每隔兩周齡的7個(gè)生長階段中用盡可能常規(guī)的儀器分別測定所選定的6個(gè)主要的抗性指標(biāo)，分別為：

(1)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率；

(2)單抗標(biāo)記的CD4⁺、CD8⁺、T細(xì)胞數(shù)量，CD4⁺∶CD8⁺的比例；

(3)IgG和IgM；

(4)免疫細(xì)胞指數(shù)：胸腺、脾臟、法氏囊的絕對重量與雞體重量；

(5)血液指標(biāo)：每毫升血液里紅細(xì)胞，白細(xì)胞總數(shù)、T細(xì)胞、B細(xì)胞總數(shù)；

(6)細(xì)胞因子指標(biāo)：干擾素；

然后將上述6個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以綜合評(píng)分作為判定樣本抗性程度的依據(jù)。

我們使用盡可能常規(guī)的儀器和盡可能簡便的方法，將現(xiàn)有的技術(shù)簡化，盡可能做到簡單易行且準(zhǔn)確。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對同群體，使用單一的或其中幾個(gè)抗性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，會(huì)忽略一些對抗性有影響的因素的作用，從而得到的結(jié)果欠準(zhǔn)確，而使用本發(fā)明的方法來進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)，會(huì)得到較單一或幾個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)更加全面、準(zhǔn)確的結(jié)果(具體數(shù)據(jù)說明見下表)。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，對肉雞的抗性評(píng)價(jià)具有全面、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，有廣闊的應(yīng)用前景。我們對群體中的每個(gè)個(gè)體進(jìn)行打分，匯總后得到一個(gè)平均分，來評(píng)價(jià)該群體。分?jǐn)?shù)為10-7(包括7)時(shí)，說明具有高抗性；為7-4(包括4)時(shí)，說明具有中度抗性；在4以下時(shí)，說明具有低抗性。

附圖說明：

圖1：T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化

圖2：CD4PE-A

圖3：紅細(xì)胞

圖4：白細(xì)胞

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1本發(fā)明選取的6個(gè)抗性指標(biāo)的具體的測定方法：

1、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定

取無菌肝素抗凝血0.1ml，加入1.8ml細(xì)胞培養(yǎng)液(用前調(diào)至含小牛血清10％、青霉素100u/ml、鏈霉素μg/ml，用NaHCO3調(diào)pH至7.2-7.4)中，同時(shí)加入PHA(用RPMIl?640基礎(chǔ)培養(yǎng)液配成1000μg/ml)0.1ml，對照管不加PHA，將細(xì)胞置37℃、5％CO2培養(yǎng)3天，每天搖動(dòng)1次。2500r/min，離心10min后棄上清液，留0.2ml沉淀細(xì)胞制片，迅速吹干。吉姆薩染色10-20min，水洗，干燥。由于大的細(xì)胞離心后居上層者較多，只吸上層細(xì)胞推片計(jì)數(shù)，結(jié)果易偏高。所以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)方法是在倒凈上清后，殘留與管壁的少量液體回流至管底后，用毛細(xì)滴管吹打?qū)⒐軆?nèi)細(xì)胞打散，置1滴于玻片上，用毛細(xì)滴管前端刮片，均勻分布于全片，染色，按頭、體、尾三段各1～2縱列(計(jì)數(shù)走向似城墻形)進(jìn)行計(jì)數(shù)，以減少分布不均帶來的誤差，每片計(jì)數(shù)100～200個(gè)淋巴細(xì)胞。記錄轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)，求出轉(zhuǎn)化率。

表1-1：應(yīng)用此方法測定的如皋雞8周齡的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率