[發(fā)明專利]一種從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010159985.4
• 申請日: 2010-04-30
• 公開（公告）號: CN101906124A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏立秋;丁學知;余子全;楊尉;伍維
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南師范大學
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/08
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所 43205
• 代理人: 寧星耀

1.一種從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，包括以下步驟：（1）發(fā)酵液預處理：發(fā)酵結(jié)束后放罐前，加入3～5?mol/L的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH=8.0～11.0，然后將發(fā)酵液加熱升溫至60～80℃，保溫并以300-800r/min速度攪拌處理30～60?min；（2）浸泡提取：預處理后的發(fā)酵液冷卻至室溫后，按發(fā)酵液與極性有機溶劑體積比=1:0.5～2加入高介電常數(shù)極性有機溶劑，在10～40℃條件下浸泡、攪拌提取4～20小時，得到多殺菌素浸提液；多殺菌素浸提液用固液分離技術(shù)處理，棄去菌體固形物沉淀，收集浸提清液；（3）將浸提清液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或真空濃縮罐中，在40～50℃條件下，通過真空濃縮，將發(fā)酵液中的高介電常數(shù)極性溶劑揮發(fā)除去，得到多殺菌素濃縮液；（4）在多殺菌素濃縮液中加入低介電常數(shù)或高碳醇類萃取溶媒進行萃取，萃取條件為：萃取溶媒與多殺菌素濃縮液體積比=1:1～5，溫度20～45℃，pH=7.0～11.0，萃取時間3～10min；萃取完成分層后，收集負載有機相；（5）向負載有機相中加入酸水進行反萃取，反萃取條件為：負載有機相與酸水體積比=1～5:1，酸水濃度0.1～0.4?mol/L，溫度10～30℃，反萃取時間1～5?min，反萃取級數(shù)為1～5；反萃取分層完成后收集反萃取相；（6）用真空濃縮法或吹氣法除去反萃取相中殘留的萃取溶媒，用?NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值=8.5～11.5，使多殺菌素以結(jié)晶形式沉淀出來，過濾，用pH=9.0～11.0的稀堿溶液將多殺菌素沉淀洗滌1～3次，真空干燥，即得到多殺菌素粉劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（2）步，所述高介電常數(shù)極性溶劑是選自甲醇、丙酮、乙醇、乙腈中的一種或二種以上。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（4）步，所述低介電常數(shù)萃取溶媒是選自乙酸丁酯、乙酸乙酯、乙酸戊酯、正己烷、石油醚、甲苯、二甲苯中的一種；所述高碳醇萃取溶媒是選自正辛醇、異辛醇、仲辛醇中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（5）步，所述反萃取用酸水是選自酒石酸、草酸、檸檬酸、蘋果酸、鹽酸的水溶液中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（5）步，所述反萃取用酸水是選自酒石酸、草酸、檸檬酸、蘋果酸、鹽酸的水溶液中的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（2）步，發(fā)酵液與極性有機溶劑體積比=1:1.5，浸泡溫度為20～30℃，攪拌時間10～15小時。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（4）步，萃取溶媒與多殺菌素濃縮液體積比=1:2.5，萃取溫度30℃，萃取pH=10.0，萃取時間8?min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（5）步，負載有機相與酸水體積比=1:2.5，酸水濃度0.15?mol/L，溫度18℃，反萃取時間2?min。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（5）步，負載有機相與酸水體積比=1:2.5，酸水濃度0.15?mol/L，溫度18℃，反萃取時間2?min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從刺糖多孢菌發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝，其特征在于，所述第（6）步，用?NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值=10.0。