[發明專利]一種雙抗體復合的視黃醇結合蛋白檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201010159837.2
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號: CN101833009A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 尹鵬
• 申請（專利權）人: 浙江康特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 浙江翔隆專利事務所 33206
• 代理人: 張建青

技術領域

本發明涉及醫學免疫體外診斷領域，特別是一種檢測血清或尿液中的視黃醇結合蛋白測定試劑盒。

背景技術

視黃醇結合蛋白(RBP)為血液中視黃醇(維生素A)的轉運蛋白。1961年Berggard在免疫電泳中發現在α₂-球蛋白區域能形成一條長沉淀線的蛋白質，曾稱為長α₂-球蛋白。在以后幾十年中，人們對這種蛋白質的分子結構、生物學特性等進行了全面研究，發現這種蛋白質廣泛地分布于正常人體液中，屬α₁-球蛋白，具有從肝細胞中轉運視黃醇至周圍組織的功能。現認為血液中RBP主要以視黃醇、前白蛋白結合的復合物形式存在，當復合物中視黃醇與靶細胞結合后，RBP便與前白蛋白分離，自腎小球濾出，由近端腎小管上皮細胞吸收、降解。近年來的深入研究表明RBP含量改變能夠敏感地反映近端腎小管功能、肝功能損害程度，是反映腎臟、肝臟及營養性疾病發展、轉歸的敏感指標。

目前RBP的測定方法主要有酶聯免疫法(EIA)、放射免疫法(RIA)及(ITA)，在上述三種方法中免疫透射分析法因其試劑穩定，操作自動化，檢測結果快速、準確、可靠，因此成為臨床實驗室最具前景的測定方法。但目前市場視黃醇結合蛋白測定試劑盒由于抗體的純度不夠或效價達不到要求，同時，試劑配制過程中單純采用一種抗體，導致試劑盒特異好而靈敏度不夠，或靈敏靈較高但特異性較差。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述現有試劑盒存在的缺陷，提供一種雙抗體復合的測定試劑盒來檢測血清或尿液中視黃醇結合蛋白的含量，以達到操作簡便、靈敏度高、特異性好，快速，測定結果準確可靠的目的。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種雙抗體復合的視黃醇結合蛋白檢測試劑盒，由試劑R1、試劑R2及校準品三部分組成，試劑R1為磷酸鹽緩沖體系，其組成為pH＝7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液35-60mmol/L、聚乙二醇6000-8000?60-95mmol/L和乙二胺四乙酸二鈉6-13mmol/L；試劑R2為抗體液，其組成為鼠抗人單克隆抗體2-4ml/L(效價大于1∶128)、兔抗人多克隆抗體3-5ml/L(效價大于1∶16)、pH＝7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液35-60mmol/L和乙二胺四乙酸二鈉6-13mmol/L；校準品為110mg/L人血清基質的凍干品，其還包括疊氮鈉0.2-2.2％、吐溫-20?1-10％、牛血清白蛋白1-3％，上述的百分比為人血清基質體積用量的百分比。上述的疊氮鈉也可采用其他的防腐劑，吐溫-20也可采用其他的穩定劑，牛血清白蛋白也可采用其他的表面活性劑。

本發明采用的復合抗體中羊抗人多克隆抗體效價大于1∶16，鼠抗人單克隆抗體效價大于1∶128，多抗保證線性與高值，單抗保證靈敏度與低值；高純度、高效價的抗體可以采用單點定標線性模式在1-110mg/L內即可完全保證測定結果的準確性，操作較其它廠家試劑盒采用的多點定標模式簡便、快速，節約成本，測定結果準確可靠。本發明采用多克隆抗體和單克隆抗體的復合抗體保證了靈敏度與高線性，與目前臨床實驗室所用的視黃醇結合蛋白試劑盒比較，測定結果準確性大大提高。

本發明中，對所述的抗體進行了純化處理，其方法如下：用粗抗原或純化抗原交聯到瓊脂糖凝膠4B制成親和層析柱，將粗抗體通過所述的親和層析柱，洗去未結合的非特異性蛋白，再用硫氰酸鉀洗脫，洗脫流出液即為純的多克隆抗體。親和層析技術的應用，大大提高了抗體的純度與效價，最大限度避免了非特異性反應，使結果準確性有了較大提高，精密度更好。

抗體的保存：凍干抗體具有穩定性好、保質期長等特點，適合于長期保存，配成試劑后可加適量甘油與牛血清白蛋白(BSA)作穩定劑。

本發明試劑盒的緩沖體系是PH值為7.2-7.6磷酸鹽緩沖液，由于免疫復合物的形成有時限變化，當抗原抗體相遇后立即結合成小復合物(＜19S)，幾分鐘到幾小時才形成可見的復合物(＞19S)。作為快速比濁測定，這種速度太慢，因此，加入聚合劑(或促聚劑)可加速大的免疫復合物形成。本發明加入促聚劑為多用聚乙二醇(MW6000～8000)，濃度約為4-6％。