[發明專利]一種快速檢測細胞內火雞皰疹病毒的方法

有效

• 申請號: 201010157599.1
• 申請日: 2010-04-28
• 公開（公告）號: CN101812542A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 揭鴻英;侯繼波;何家惠;唐應華;吳培培;于漾
• 申請（專利權）人: 國家獸用生物制品工程技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 王荷英

1.一種快速檢測細胞內火雞皰疹病毒的方法，包括如下步驟：

(1)樣品處理：用胰酶消化待檢測的感染HVT-FCl26的雞胚成纖維細胞， 離心后取沉淀，用緩沖液懸浮該沉淀，即得到樣品DNA；

(2)PCR擴增反應：以樣品DNA作為模板，以HVT_F、HVT_R為引物，進行 PCR擴增反應，獲得PCR擴增產物；

所述HVT_F的序列為5′-TTCGACATTCATGATGTTCTGGTG-3′，

所述HVT_R的序列為5′-TGCGCTCGAAGAGTTACCGATC-3′；

所述PCR擴增反應體系為：樣品DNA、2.5μL的10×PCR緩沖液、2μL濃 度為25mM的MgCl₂、0.5μL濃度為10mM的dNTPs、1.5μL濃度為10μmol/L的 HVT_F、1.5μL濃度為10μmol/L的HVT_R、0.5μL濃度為5U/μL的TaqDNA聚 合酶、14.5μL的ddH₂O；所述PCR擴增反應程序為94℃預變性10min；94℃變 性45sec、54-57℃退火45sec、72℃延伸1min，35次循環；最后72℃延伸10min， 獲得PCR擴增產物；

(3)電泳檢測及結果分析：取PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，若PCR電泳圖 譜中，對應于樣品DNA的泳道在666bp處有特異性擴增條帶，則該樣品感染了火 雞皰疹病毒。

2.根據權利要求1所述的快速檢測細胞內火雞皰疹病毒的方法，其特征在 于所述的退火溫度為55℃。