[發明專利]一種水稻DNA快速提取試劑盒

有效

• 申請號: 201010157375.0
• 申請日: 2010-04-27
• 公開（公告）號: CN101812445A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 曾大力;錢前;饒玉春;張光恒;劉堅;胡江;高振宇;楊窯龍;郭龍彪
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明涉及一種從水稻中快速提取DNA應用于PCR反應的試劑盒。

背景技術

基于PCR技術為基礎的分子標記已廣泛地運用于種子純度鑒定、親緣關系的分析、 分子標記輔助育種、基因定位以及轉基因植株檢測等。尤其是，DNA分子標記輔助選擇 育種已成為分子技術在作物改良中的一個重要應用，即通過對與表型緊密連鎖的DNA分 子標記的篩選，以快速獲取帶目的表型的理想植株。隨著生物技術的不斷發展、水稻基因 組測序的完成、功能基因鑒定的日益增多，分子標記輔助選擇育種越來越多地應用于作物 新品種改良。

為了應用PCR檢測技術，人們需要從組織樣品中提取DNA。然而，DNA提取是一項 耗費人力、物力的繁瑣工作，提取的DNA也僅在篩選、鑒定時使用了很少的一部分，剩 余的大部分DNA將作為累贅而被廢棄。盡管人們也一直致力于DNA抽提方法的探討， 但目前應用的主要方法仍然煩瑣費時。因此，在大規模的基于PCR的基因型檢測作業中， 高效、快速、簡便的模板DNA制備顯得非常重要。

目前已公開的一種用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法(王蘭、龍云銘、劉耀 光，分子植物育種.2009，7(2)：425-428)，存在著如下缺陷：

1、操作較費時，僅破碎組織樣品的時間就需要5min；

2、僅能以葉片為原料進行提取，且最少要求有4mg的葉片；因此原料的適應性較差；

3、所得的DNA溶液主要用于短期使用：用TE制備的DNA在4℃下可保存10d以 上，在冷凍下可保存半年；不利于長期保存。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種能從水稻組織中高效、快速、簡便提取模板DNA 的水稻DNA快速提取試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種水稻DNA快速提取試劑盒，包括β-巰基乙醇、 作為預處理液的試劑A、作為提取緩沖液的試劑B和作為PCR反應緩沖液的試劑D；

試劑A包括100～200mM?sorbitol(山梨醇)、100～150mM?Tris(三羥甲基氨基甲烷)、 20～30mM?EDTA-Na₂(乙二胺四乙酸二鈉)、400～600mM?NaCl、15～25mM?Na₂SO₃、質 量濃度0.8％的CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)和質量濃度2％的sarkosyl(N-十二烷基肌 氨酸鈉)，其余為蒸餾水；pH7.5；

試劑B包括90～110mM?Tris、450～550mM?KCl、15～20mM?MgCl₂和質量濃度1％的 Triton?X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)，其余為蒸餾水；pH9.0；

試劑D包括40～60mM?Tris、200～300mM?KCl、8～10mM?MgCl₂、質量濃度0.5％的Triton X-100和體積濃度5～10％的BSA(牛血清白蛋白)，其余為ddH₂O(去離子滅菌水)；pH9.0。

作為本發明的水稻DNA快速提取試劑盒的改進：該試劑盒還包括蒸餾水、氯仿和鋼珠。

作為本發明的水稻DNA快速提取試劑盒的進一步改進：

試劑A含有150mM?sorbitol，125mM?Tris，25mM?EDTA-Na₂，500mM?NaCl，20mM Na₂SO₃，質量濃度0.8％的CTAB，質量濃度2％的sarkosyl；其余為蒸餾水；pH7.5；

試劑B含有100mM?Tris，500mM?KCl，18mM?MgCl₂，質量濃度1％的Triton?X-100， 其余為蒸餾水；pH9.0；

試劑D含有50mM?Tris，250mM?KCl，9mM?MgCl₂，質量濃度0.5％的Triton?X-100， 體積濃度10％的BSA；其余為ddH₂O；pH9.0。