[發明專利]一種薄層層析-酶抑制法檢測農藥試劑盒及膽堿酯酶條的制備方法

無效

• 申請號: 201010157251.2
• 申請日: 2010-04-26
• 公開（公告）號: CN101832986A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 繆煜清;齊曉雪;王玉輝
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;C12Q1/46
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

技術領域

本發明涉及農藥檢測領域，尤其涉及一種薄層層析-酶抑制法檢測農藥試劑盒。

背景技術

農藥在農業上作為農作物防治病、蟲、雜草害的主要方法，對促進農業豐收起到很重要的作用，但由于長期、大量的使用，一些性質穩定、不易分解破壞的農藥在自然界產生嚴重污染，造成農藥公害。為了減少農藥的環境污染，防止中毒事故發生，農藥殘留的監測是必不可少的。在農藥殘留監測方法中，薄層層析與酶化學抑制相結合的技術是一種很重要的監測方法，此方法pH條件要求較寬，對純化要求不高，樣品處理較簡單、快速，可以檢測多種有機磷和氨基甲酸酯類農藥，特異性好，靈敏度高，克服了以往酶化學方法中的一些缺點。

色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經該種物質，進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。薄層層析是一種微量、快速和簡便的色譜方法。由于各種化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動，進行不同程度的解析，根據原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值(Rf)：

化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強，因此Rf值較小。在給定的條件下(吸附劑、展開劑、板層厚度等)，化合物移動的距離和展開劑移動的距離之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常數，其大小只與化合物本身的結構有關，因此可以根據Rf值鑒別化合物。

動物的血清、肝臟和神經組織內均合有膽堿酯酶，它能分解乙酰膽堿和其他酯類，使動物體內的生化代謝活動得以正常進行。但當膽堿酯酶遇到有機磷、氨基甲酸酯或其他某些農藥時，分解作用就會受到抑制或破壞，使正常的生化代謝活動不能繼續進行，這實際上就是動物農藥中毒的基礎。對于動物體外的膽堿酯酶，上述農藥也同樣具有抑制作用。在膽堿酯酶正常活動的情況，乙酰膽堿被水解為膽堿及醋酸，其他酯類也會被分解為某些酚類化合物及有機酸，這些分解生成物遇到特定的染色劑時就會顯色或變色，甚至某些分解物本身也會有呈色反應。利用這一反應原理，如果在經過點樣、展開的薄層板上同時噴以膽堿酯酶和能被膽堿酯酶分解的酯類，酯類就會被分解，生成能與特定染色劑起呈色反應或本身就具有呈色反應的酚類化合物或有機酸，而在農藥所在之處，由于酶的作用受到抑制，酯類不能分解，呈色物質難以生成，所以當噴以染色劑或經顯色處理后，就會在已顯色或已變色的板面上形成獨特的斑點，從而達到了測定的目的

現將乙酰膽堿或其他酯類的分解產物能使農藥顯出斑點的過程及原理如下：

反應的原理：

酶正常活動時：反應基質(即酯類)與酶作用分解為生成物(即酚類及有機酸)。

酶+基質→酶、基質→酶+生成物

有抑制物(即農藥)存在時：酶被抑制，反應基質不能被分解，無生成物形成。

酶+抑制物→酶抑制物(被抑制的酶)酶抑制物+基質→無生成物

例如：吲哚乙酸酯在酶的作用下分解為吲哚酚及醋酸，吲哚酚氧化后顯靛藍色。

C6H4NHC:COOCH3+H2O→CH3COOH+C6H4NHC:COH

吲哚乙酸酯??????????????????????????吲哚酚

→C6H4NHCOC:COCHNH4C6

靛藍色

靛酚乙酸酯在酶的作用下分解為靛酚及醋酸，顯出靛酚的藍色。

CH3COOC6H4N:C6H4:O+H2O→HOC6H4N:C6H4:O+CH3COOH

靛酚乙酸酯????????????????????靛酚(藍色)

該技術一般涉及酶試劑、薄層層析板、展開劑、底物顯色劑和標準農藥，其中基于薄層層析法的特點，在使用酶試劑、底物顯色劑時，往往采用噴灑至板全濕的方法，使得試劑的用量增多，造成試劑不必要的浪費。一般而言，膽堿酯酶具有不穩定性，在體外不容易保存，通常需要冷凍保存，使用前需要溶解分裝，使用很不方便。

發明內容

本發明的目的提供一種薄層層析-酶抑制法檢測農藥試劑盒，以方便薄層層析-酶抑制法檢測農藥。為此，本發明采用以下技術方案：它包括固化的膽堿酯酶條、薄層層析板，展開劑、底物顯色條和標準農藥，所述固化的膽堿酯酶條包括條狀載體以及固化在所述條狀載體上的膽堿酯酶。