[發(fā)明專利]用于檢測(cè)干燥綜合癥α-胞襯蛋白抗體的膠體金檢測(cè)卡

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010157064.4
• 申請(qǐng)日: 2010-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN102236016A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方志遠(yuǎn);曾令文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/552
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種干燥綜合癥α-胞襯蛋白(α-fordin)蛋白抗體的快速檢測(cè)產(chǎn)品。

背景技術(shù)

原發(fā)性干燥綜合征(Primary?sjogren’s?syndrome，pSS)是一種在遺傳、病毒感染和性激素異常等多種因素作用下，引起機(jī)體細(xì)胞免疫及體液免疫反應(yīng)異常的自身免疫病。國(guó)外及國(guó)內(nèi)何菁等的研究證實(shí)α-胞襯蛋白與原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病有密切關(guān)系，對(duì)本病的診斷具有重要參考意義。

陳巧林等進(jìn)一步利用生物信息學(xué)方法對(duì)α-胞襯蛋白抗原表位進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，并以融合蛋白的方式體外重組表達(dá)含重疊序列的α-胞襯蛋白片段，對(duì)其抗原表位進(jìn)行了篩選和鑒定，發(fā)現(xiàn)其序列中1～59位氨基酸為主要抗原表位所在區(qū)域(陳巧林，樸海燕，何菁等.干燥綜合征特異性α-胞襯蛋白的抗原表位篩選及鑒定[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2005；21(11)：864-872.)，其自身抗體在原發(fā)性干燥綜合征中的陽(yáng)性率為63.75％(陳巧林，李晶，張翠華等.重組α-胞襯蛋白的表達(dá)及其在原發(fā)性干燥綜合征臨床研究中的意義[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2006；22(12)：1146-1149.)，在SSA抗體陰性、SSB抗體陰性和ANA陰性的原發(fā)性SS受測(cè)者中該表位多肽抗體的陽(yáng)性率分別為37.5％、42.7％和48.2％，因此該表位多肽抗體的檢測(cè)對(duì)于SSA抗體、SSB抗體及ANA陰性的原發(fā)性SS受測(cè)者的診斷具有重要意義，是臨床原發(fā)SS受測(cè)者現(xiàn)有診斷抗體的有效補(bǔ)充(陳巧林，李想，何文智等.α-胞襯蛋白抗原多肽的篩選及其在干燥綜合征臨床診斷中的意義[J].臨床免疫學(xué)，2007；23(11)：1022-1025.)。

近年來(lái)常用的抗體檢測(cè)方法多為ELISA法，但檢測(cè)需要特殊的儀器設(shè)備，且需要長(zhǎng)時(shí)間的預(yù)雜交、雜交洗滌過(guò)程，并且要求專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行，操作復(fù)雜，不適宜做現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。因此，人們?nèi)匀恍枰獙ふ铱焖佟㈧`敏、低成本、操作簡(jiǎn)易的檢測(cè)工具。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷的檢測(cè)干燥綜合癥自身抗體的檢測(cè)卡。

本發(fā)明所述的一種用于檢測(cè)干燥綜合癥α-胞襯蛋白自身抗體的膠體金檢測(cè)卡，包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述玻璃纖維上涂有納米膠體金標(biāo)記的重組蛋白G；所述硝酸纖維素膜上固定有：大分子蛋白偶聯(lián)α-胞襯蛋白表位多肽，該α-胞襯蛋白表位多肽序列如SEQ?ID?NO：1所示；以及抗重組蛋白G抗體；其中，固定于靠近吸水紙一端的抗重組蛋白G抗體形成質(zhì)控線，固定于靠近玻璃纖維一端的大分子蛋白偶聯(lián)α-胞襯蛋白的表位多肽形成檢測(cè)線。

重組蛋白G(Recombinant?Protein?G)是從Streptococci細(xì)菌中分離出來(lái)的胞壁蛋白，可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合，重組蛋白G已經(jīng)除去了其與白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)，減少了交叉反應(yīng)和非特異性結(jié)合。因此，與天然蛋白G相比，重組蛋白G與蛋白A具有更大的親和力與穩(wěn)定性。

本發(fā)明所述檢測(cè)卡中α-fordin蛋白的表位多肽為大分子偶聯(lián)，其多肽序列為FQFFQRDAEELEKW(SEQ?ID?NO：1)，是發(fā)明人經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定的α-fordin蛋白的優(yōu)選抗原表位多肽。

根據(jù)本發(fā)明所述的膠體金檢測(cè)卡的進(jìn)一步特征，所述質(zhì)控線與檢測(cè)線相距3-10mm。

根據(jù)本發(fā)明所述的膠體金檢測(cè)卡的進(jìn)一步特征，所述固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙的相鄰部分彼此重疊1-5mm。

根據(jù)本發(fā)明所述的膠體金檢測(cè)卡的進(jìn)一步特征，所述納米膠體金的粒徑為8-100nm。

根據(jù)本發(fā)明所述的膠體金檢測(cè)卡的進(jìn)一步特征，所述偶聯(lián)α-胞襯蛋白表位多肽的大分子蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白或鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白；反應(yīng)支持物優(yōu)選PVC板，金標(biāo)重組蛋白膜優(yōu)選聚酯膜、玻璃纖維膜。

本發(fā)明所述檢測(cè)卡檢測(cè)的抗體為針對(duì)人α-胞襯蛋白N端46-59氨基酸位點(diǎn)的自身IgG、IgA抗體；所檢測(cè)的樣本為受測(cè)者的血清、血漿或全血。