[發明專利]OBR基因及其作為鵝脂肪性狀遺傳標記的用途

無效

• 申請號: 201010155783.2
• 申請日: 2010-04-27
• 公開（公告）號: CN101921771A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 曲湘勇;何俊;蔣雋
• 申請（專利權）人: 曲湘勇;湖南農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為

技術領域：

本發明涉及鵝的分子生物學技術及育種領域，具體是涉及測定與腹脂重、腹脂率和血漿VLDL濃度等相關特征的遺傳標記的存在，更具體地說，是涉及測定顯示該些特征的OBR基因的差異，再進一步具體地說，是測定OBR基因中的多態性，即與腹脂重、腹脂率和血漿VLDL濃度相關的鵝OB(obese)基因的單核苷酸多態性(Single?nucleotide?polymorphism，縮寫為SNP)的存在。

背景技術：

現代家禽遺傳育種理論和應用的發展，使肉用家禽特別是肉雞、肉鴨的生長速度和飼料效率大幅度提高，生產效率與工廠化生產逐相適應。但同時也容易帶來胴體腹部脂肪和皮下脂肪的大量沉積，導致飼料能量的浪費和胴體品質不佳。

OB(obese)基因編碼一種瘦蛋白質(Leptin)的肽類激素，可抑制脂肪蓄積和維持脂肪細胞大小正常。目前有許多關于人、鼠OB基因以及少量關于豬0B基因的研究報道，但家禽OB基因的研究報道還鮮見。OBR(obese?receptor)基因在Lepein的信號轉導起極重要作用，它與機體脂肪沉積有關，故OBR基因可作為脂肪沉積候選基因。雞OB基因的cDNA于1998年Taouis等克隆和測序，編碼長度492bp，編碼163個氨基酸，含18個氨基酸信號肽，成雞Leptin由146氨基酸組成。Ashwell等用Northern檢測發現，雞的Leptin在脂肪組織和肝臟中都有表達。雞OBR的cDNA于2000年Guy?Horev等和Takeshi等被克隆，與其他哺乳動物OBR核苷酸序列的同源性平均為60％，Dunn等將雞的OBR基因定位于8號染色體上。顧志良等報道了對雞的OBR基因的外顯子9的部分序列進行克隆和測序，發現一個堿基有突變，產生了多態性，但氨基酸序列沒有改變(沉默突變)。顧志良等進一步用PCR-SSCP方法研究不同品種雞的OBR基因表明：北京油雞AA基因型頻率與其它雞種存在差異，高脂系A基因頻率比低脂系高，并推測基因A可能與沉積較多腹脂有關。李志輝等研究結果表明，雞OBR基因外顯子9的SNPs基因型對肉雞腹脂重和腹脂率有顯著影響，可以用于雞脂肪性狀的標記輔助選擇。

目前，有關鵝的DNA遺傳標記、遺傳多樣性和相關功能基因的研究相對雞來說還很少，且沒有關于鵝OBR基因的研究報道。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是：針對上述現有技術的不足，提供一種OBR基因及其作為鵝脂肪性狀遺傳標記的用途；同時篩選與鵝脂肪沉積相關的SNP，以期應用于標記輔助選擇或標記輔助滲入，并提供上述遺傳標記在鵝標記輔助選擇中的應用。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種OBR基因，是與表示鵝脂肪性狀的腹脂重、腹脂率和血漿VLDL濃度相關的基因，其DNA序列如SEQ?ID?NO.1所示。上述OBR基因序列的第55bp處有一個A→G的突變，導致多態性的存在。

克隆OBR基因和檢測55A-55G堿基處突變所用引物的序列如下：

正向引物：5’-GTGCTGTACTTCCCTACTAAG-3’，

反向引物：5’-TGGCATTCCCTATTTTGA-3’。

上述OBR基因在鵝遺傳標記輔助選擇中的應用。

一種鑒定鵝脂肪性狀的遺傳標記的方法，該鵝具有與表示鵝脂肪性狀的腹脂重、腹脂率和血漿VLDL濃度相關的基因，該方法包括測定從鵝獲得的核酸樣品中OBR基因中多態性的存在，該多態性是與表示鵝脂肪性狀指標的腹脂重、腹脂率和血漿VLDL濃度相關的多態性，該多態性在OBR基因序列的55bp處有一個A→G的突變。

上述方法包含克隆得到一個如權利要求1所述OBR基因的DNA序列，該基因的該基因外顯子9編碼序列，擴增目的片斷長度217bp，第55堿基處有一個堿基突變A55-G55。

克隆OBR基因和檢測55A-55G堿基處突變所用引物的序列為：

正向引物：5’-GTGCTGTACTTCCCTACTAAG-3’，

反向引物：5’-TGGCATTCCCTATTTTGA-3’。

上述方法在鵝育種中的應用。

現代家禽遺傳育種理論和應用的發展，使肉用家禽特別是肉雞、肉鴨的生長速度和飼料效率大幅度提高，生產效率與工廠化生產逐相適應。但同時也容易帶來胴體腹部脂肪和皮下脂肪的大量沉積，導致飼料能量的浪費和胴體品質的不佳。針對這個問題，本發明人選擇鵝作為研究對象，采用分子生物學的方法篩選鵝脂肪性狀相關基因，其步驟如下：