[發(fā)明專利]一種酸性葡聚糖酶CELA及其基因和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010154928.7
• 申請(qǐng)日: 2010-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101851612A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-10-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚斌;柏映國(guó);孟昆;羅會(huì)穎;石鵬君;黃火清;王亞茹;袁鐵錚;楊培龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所
• 主分類號(hào): C12N9/42
• 分類號(hào): C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A23K1/165
• 代理公司: 北京法思騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇;楊小蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種酸性葡聚糖酶CELA及其基因和應(yīng)用。

背景技術(shù)

β-葡聚糖廣泛存在于禾谷類(大麥、燕麥、黑麥和小麥)的糊粉層和胚乳細(xì)胞壁中，屬植物細(xì)胞壁中的結(jié)構(gòu)性非淀粉多糖，具有線型的空間結(jié)構(gòu)，依物種不同，β-葡聚糖的含量及所占比例也不同。其中在大麥和燕麥當(dāng)中所含比例最高。葡聚糖酶是可將葡聚糖降解成低聚糖和葡萄糖的一類酶的總稱。目前葡聚糖酶在食品，飼料，啤酒、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前大麥主要被應(yīng)用于啤酒的釀造和飼料中，因此相關(guān)的葡聚糖酶在啤酒釀造和飼料工業(yè)中得到了最為廣泛的應(yīng)用，尤其在歐洲，以大麥，豆粕為主要原料的飼料配方中，葡聚糖酶的添加更為廣泛。大麥發(fā)芽過(guò)程中，大麥當(dāng)中的葡聚糖不能夠被自身內(nèi)源性葡聚糖酶完全分解，通常僅能分解30％-70％，殘留的葡聚糖使糖化醪粘度增加，過(guò)濾速率降低，成品啤酒容易形成霧濁或早期凝膠沉淀。在麥芽制造中，加入耐高溫β-葡聚糖酶可顯著降低成品麥芽中β-葡聚糖含量，降低麥汁粘度，提高麥汁濾速及得率，有利于改善啤酒風(fēng)味，保持成品酒的非生物穩(wěn)定性。在以大麥、小麥、黑麥、燕麥為基礎(chǔ)的畜禽飼料中含有大量的β-葡聚糖，由于單胃動(dòng)物體內(nèi)沒(méi)有消化β-葡聚糖的酶，因此不能夠水解飼料當(dāng)中的β-葡聚糖。β-葡聚糖作為一種非淀粉粘性多糖，在腸道內(nèi)吸收較多的水分后，具有較高的粘度，阻止腸道消化液與食糜充分接觸，從而影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，成為一種抗?fàn)I養(yǎng)因子。添加β-葡聚糖酶，可以有效消除β-葡聚糖的抗?fàn)I養(yǎng)作用，大大提高了飼料的利用效率。

在飼料工業(yè)中，動(dòng)物胃腸道是酸性環(huán)境(如豬的胃腸道)，并且含有大量的內(nèi)源性蛋白酶，同時(shí)在飼料的加工過(guò)程中，有一個(gè)短時(shí)的高溫過(guò)程。因此，獲得新型具有優(yōu)良溫度穩(wěn)定性和適用性的，具有對(duì)各種蛋白酶(特別是胃蛋白酶)具有抗性的酸性葡聚糖酶的研究具有重大意義?？寺『头蛛x具有溫度穩(wěn)定性和蛋白酶抗性的酸性葡聚糖酶可以更好的應(yīng)用于飼料，而且可以降低生產(chǎn)成本，都是葡聚糖酶應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)所必需的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能高效應(yīng)用的酸性葡聚糖酶。

本發(fā)明的再一目的是提供編碼上述酸性葡聚糖酶的基因。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組載體。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組菌株。

本發(fā)明的另一目的是提供一種制備上述酸性葡聚糖酶的基因工程方法。

本發(fā)明的另一目的提供上述酸性葡聚糖酶的應(yīng)用。

本發(fā)明從脂環(huán)酸芽孢桿菌Alicyclobacillus?hesperidum?A4，(保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，100101)，其保藏號(hào)為：CGMCC?No.3147，保藏日期：2009年6月29號(hào))中分離得到一種新的酸性葡聚糖酶CELA。

本發(fā)明提供了一種酸性葡聚糖酶CELA，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

SEQ?ID?NO.1：

MSPSGGVCVNRKQRTLKLGTLAATIVALSAVATPAVASADTTTAIASSTVHVTV

NAAAELGIVPNTALGVNTAVWDGHLLDAAIPSLLRGIGVTMLRYPGGSTSDE

YNWQTNTVTGGYADPNNTFDNFMGVVQKAGAQPIITVNAGTGTPSEAAAW

VQDANVTHHYGVKYWEIGNEMYGSWEAGNFANNPSGYAKEAVSFIQAMKA

VDPSIKIGVDLIAPGTGEDDWNATVLSTMHSLGVLPDFAIVHWYAQNPGGET

DAGLLSSTNQISTMMDTLKQQLSSYGTIPVFVTETNSVSYNPGRQSTSLVNAL

FLDDDMADWLESGAQNVDWWDLHNGIVTQQAGANVDPNLYGQYNYGDY

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