[發(fā)明專利]檢測人乳頭瘤病毒的基因芯片及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010151982.6
• 申請日: 2010-04-20
• 公開（公告）號: CN101818213A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭興中;石慧;董正偉;方國偉;郭堯
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 徐關(guān)壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種含有人乳頭瘤病毒(HPV) 各亞型探針的基因芯片，本發(fā)明還涉及一種用于HPV檢測及分型的試劑盒。

背景技術(shù)

全球每年約有51萬名婦女被診斷為宮頸癌，其是僅次于乳腺癌的人類第二 大婦科惡性腫瘤，并且其發(fā)病現(xiàn)在呈年輕化趨勢。在國內(nèi)，每年新增宮頸癌病例 約13.5萬，占全球發(fā)病數(shù)量的1/3，約有8萬人因此病死亡。研究發(fā)現(xiàn)90％以上 的宮頸癌患者伴有人乳頭瘤病毒(human?papillomaviruses，HPV)感染。宮頸癌 及其癌前病變的發(fā)生是多種因素協(xié)同作用的結(jié)果，高危型HPV感染時宮頸癌演 變的始動因素，而HPV與宿主染色體的整合則是推動宮頸癌變進(jìn)展的重要事件。 因此檢測宮頸病變中HPV感染及整合情況，有利于早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷宮頸癌及 癌前病變；及時治療控制HPV感染，可預(yù)防宮頸內(nèi)瘤變發(fā)生，能有效降低宮頸 癌的發(fā)病率和死亡率，對宮頸癌的防治有極大的臨床價值。

HPV是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬雙鏈閉環(huán)的小DNA病毒。人 類是HPV的唯一宿主，它定向感染人體皮膚及粘膜的復(fù)層鱗狀上皮內(nèi)，具有高 度的宿主特異親和力。

國際癌癥研究中心(IARC)專題討論會(1995年)明確提出，HPV感染是宮頸 癌的主要病因。目前鑒定出HPV亞型100余種，其中30余種與宮頸感染和病變 有關(guān)，根據(jù)其致病力的大小分為高危型和低危型兩種：將HPV6、11、40、42等 歸為低危型，主要引起生殖道、肛周皮膚和陰道下部的外生殖性濕疣類病變、扁 平濕疣類病變和低度子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN?I)；高危型主要為HPV16、18、31、 33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82等，主要導(dǎo)致高度子宮頸 上皮內(nèi)瘤變(CIN?II、CIN?III)和宮頸癌的發(fā)生，尤其是HPV16和18型。因此， 檢測出樣本中的具體HPV亞型對于宮頸癌的防治具有重要的指導(dǎo)意義。

HPV病毒無法在體外培養(yǎng)，在體內(nèi)也不能被誘導(dǎo)出易于檢測的免疫反應(yīng)， 因此無法采用血清學(xué)檢測的方法對其進(jìn)行診斷和分型。早期HPV的診斷主要是 根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)和肉眼可見的尖銳濕疣；或是根據(jù)細(xì)胞學(xué)或病理學(xué)特征性改 變來判斷，包括巴氏涂片(Pap?Smear)和液基薄層細(xì)胞檢測(TCT)，但常會出 現(xiàn)一種未確定意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)，常可掩蓋一部分有意義的 組織病理學(xué)異常而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，需結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行確診。

近年來各種分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用為檢測病毒基因組的診斷技術(shù)，其中普 通及熒光PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優(yōu)點，但是由于其高靈敏度， 容易因非特異性擴(kuò)增而出現(xiàn)假陽性，并且由于檢測通量的局限性不能滿足臨床的 需要。HC2則是目前唯一獲得美國FDA批準(zhǔn)的，可以應(yīng)用于臨床的診斷方法。 但該方法只能檢測出樣本中是否有HPV的感染，不能鑒定出具體的HPV病毒亞 型，不利于臨床跟蹤檢查和治療。

高危型HPV?DNA整合到宿主基因組將導(dǎo)致宿主細(xì)胞產(chǎn)生包括抑癌基因功能 缺陷、激活癌基因、基因組不穩(wěn)定性和細(xì)胞永生化等一系列不可逆的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)， 是宮頸癌變的重要機(jī)制之一，其警示價值高于目前的一般HPV-DNA感染檢測， 但目前市售的試劑盒所采用的探針均缺少針對HPV整合情況的檢測，此外目前 已有的HPV檢測膜條并未明確分區(qū)檢測HPV，對于普通臨床醫(yī)生容易誤診，本 發(fā)明針對以上2種對臨床有重要意義的指標(biāo)進(jìn)行了檢測和改進(jìn)，使得臨床HPV 感染的檢測更豐富，更精確，更實用，更有價值。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本發(fā)明提供了一種可用于檢測27種HPV亞 型與人染色體整合狀態(tài)的基因芯片：

一種檢測人乳頭瘤病毒的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的 人乳頭瘤病毒檢測探針，其特征在于，所述檢測探針包括SEQ?ID?No.9-37的核 苷酸序列：

HPV6：5’-AACTACATCTTCCACATACAC-3’(SEQ?ID?No.9)

HPV11：5’-GTCTAAATCTGCTACATACAC-3’(SEQ?ID?No.10)

HPV16：5’-ATTATGTGCTGCCATATCTACTT-3’(SEQ?ID?No.11)

HPV18：5’-ACAGTCTCCTGTACCTGGG-3’(SEQ?ID?No.12)