[發明專利]脫細胞韌帶或肌腱支架的制備方法

有效

• 申請號: 201010149804.X
• 申請日: 2010-04-16
• 公開（公告）號: CN101829360A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 陳雄生;朱巍;周盛源
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61F2/08
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明涉及組織工程技術領域，具體涉及一種脫細胞韌帶或肌腱支架的制備方法。

背景技術

韌帶和肌腱損傷后修復后愈合能力差是臨床上常見的問題，這使得多種替代物應用于韌帶和肌腱的修復重建。其中異體、異種韌帶和肌腱移植物材料支架有韌帶和肌腱支架的固有特點，隨著脫細胞技術及滅菌技術的發展，宿主對異體、異種韌帶支架的免疫排斥和疾病傳染已大大降低，使得韌帶和肌腱脫細胞支架在臨床應用成為可能。目前韌帶和肌腱脫細胞韌帶支架制備方法往往聯合應用物理、化學和酶法行脫細胞，其中去污劑的使用為脫細胞的重要步驟。文獻上報道韌帶或肌腱脫細胞的物理方法、酶法及常規試劑應用差別不大，但對去污劑的選用方法報道不一，脫細胞結果也不一致。(參見文獻1.Gratzer?PF，Harrison?RD，Woods?T.Matrix?alteration?and?not?residualsodium?sulfate?cytotoxicity?affects?the?cellular?repopulation?of?a?decellularizedmatrix.Tissue-Eng.2006；12(10)：2975-83.2.Whitlocka?PW，Smitha?TL，Poehlinga?GG，Shilta?JS，Dykeb?MV.A?naturally?derived，cytocompatible，andarchitecturally?optimized?scaffold?for?tendon?and?ligament?regeneration.Biomaterials?2007；28：4321-4329.3.Woods?T，Gratzer?PF.Effectiveness?of?threeextraction?techniques?in?the?development?of?a?decellularized?bone-anteriorcruciate?ligament-bone?graft.Biomaterials?2005；26：7339-7349.)韌帶和肌腱是致密的結締組織，纖維束內外有內膜和外膜包繞使得細胞成分脫除困難，所以脫細胞周期長，脫細胞過程對細胞外基質破壞較大。各種脫細胞試劑進行脫細胞的同時，也干擾細胞外基質結構，因此減少脫細胞試劑的使用可以減輕對細胞外基質的影響，更有利于細胞粘附和生長。

點陣激光是介于有創和無創治療之間的微創治療技術，近年來常用于美容術。激光激透組織的同時可以減少周圍組織的損傷[Jih?MH，Kimyai-Asadi?A.Fractional?photothermolysis：a?review?and?update.Semin?Cutan?Med?Surg.2008Mar；27(1)：63-71]。目前尚無報道點陣激光在制備韌帶/肌腱脫細胞支架過程中的應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備韌帶/肌腱脫細胞支架的方法。

本發明人在制備韌帶/肌腱脫細胞支架過程中發現，完整的外膜/腱膜具有與外界屏障的作用，同樣阻礙細胞成分的脫除。脫細胞過程中，但當外膜/腱膜完整時，殘留的細胞成分主要堆積在外膜/腱膜下方，肌腱內部殘留細胞成分少量，而外膜/腱膜不完整處，基質內細胞成分脫除徹底。

將肌腱腱膜切開后進行脫細胞，發現使用低滲液脫細胞48h后，腱膜切開段細胞脫除徹底，而腱膜完整段細胞無明顯脫除。

可見切開肌腱腱膜有利于細胞脫除，可以明顯減少脫細胞試劑的使用，從而減少對細胞外基質的干擾。但是肌腱腱膜具有維持膠原纖維結構作用，過度的切開肌腱腱膜脫細胞96h后見膠原結構明顯松散。

因此我們認為理想的韌帶/肌腱的外膜/腱膜切開方法必須具備(1)、切開腱膜的深度合適，不能破壞膠原結構；(2)、腱膜切開均勻，比例合適，不能適當的切開肌腱腱膜有利于細胞脫除，不影響生物力學。

本發明提供了一種組織工程制備脫細胞韌帶或肌腱支架的方法，該方法在脫細胞前，先用5％-20％擊孔率，5-10mJ能量的點陣激光，對韌帶的外膜或肌腱的腱膜進行處理。