[發明專利]豬鏈球菌2型亞單位疫苗及應用

有效

• 申請號: 201010148662.5
• 申請日: 2008-10-30
• 公開（公告）號: CN101824394B
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 金梅林;李冉;張安定;陳煥春;王雅;康超;陳博
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/09;C12P21/00;A61P31/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發明是申請號為2008102253466申請案的分案申請。

本發明涉及家畜傳染病疫苗制備技術領域。具體涉及一種豬鏈球菌2型亞單位疫苗及其制備方法及應 用。本發明涉及基于豬鏈球菌2型的三種抗原蛋白基因的克隆、表達及功能驗證和應用。所述的基因表達 的抗原蛋白能夠提高豬抵抗豬鏈球菌2型的能力。

背景技術

豬鏈球菌(Streptococcus?suis，S.suis)是引起豬鏈球菌病的主要病原，依據細菌表面的莢膜多 糖(CPS)可以將S.suis分為35個血清型，分別為1/2型和1～34型，但最近也有人提出32型和34型 應該歸于streptococcus?orisratti，而不應該歸于豬鏈球菌，其中豬鏈球菌2型是毒力最強、其中豬鏈球 菌2型(SS2)致病性強、流行廣，該型亦是臨床分離頻率最高的血清型。SS2是一種重要的人畜共患病 病原體，能引起豬腦膜炎(meningitis)、心內膜炎(endocarditi)、敗血癥(septicemia)、關節炎 (arthritis)、漿膜炎(polyserositis)、肺炎(pneumonia)等，常引起斷奶仔豬或育肥豬突然死亡； 人類感染該菌，可導致腦膜炎，引發永久性耳聾、敗血癥、心內膜炎，甚至死亡。1991年首次報道在廣 東省發現豬2型鏈球菌疑似病例，1998-1999年江蘇省部分地區連續2年在盛夏季節暴發該病。目前 已有足夠的流行病學資料證實，SS2已經對我國的養殖業和人民健康構成了嚴重的威脅。

由于缺乏豬鏈球菌病的流行病學資料，致病機理不清，無有效的疫苗和敏感的診斷方法，在很多國家 豬鏈球菌病一直未能得到有效地控制。

盡管對豬鏈球菌2型的致病機理目前仍處在研究和發現階段，影響了豬鏈球菌2型疫苗研究的順利進 行，但該疫苗的研究仍取得了一定的進展。目前研究的豬鏈球菌2型疫苗主要有滅活疫苗、活疫苗、基因 工程活載體疫苗和亞單位苗，但在實際應用中各有不足之處。滅活疫苗對同源的豬鏈球菌具有較好的免疫 保護，但由于不同菌株的毒力基因表性存在較大差異，對于異源菌株的保護力不佳；活疫苗可使豬得到保 護，但不能清除定居在扁桃體或關節里的2型豬鏈球菌，也不能清除隱性感染豬扁桃體內的細菌；活載體疫 苗主要是當今與未來疫苗研制與開發的主要方向之一，疫苗兼有常規活菌苗和滅活菌苗的優點，但是按照 美國食品與藥物管理局(Food?and?drug?administ?ration，FDA)的規定，活疫苗中不能存在抗藥質粒， 并且在人和動物體內，無法用抗生素來維持重組質粒的穩定性；亞單位苗具有活菌苗的免疫效力高、及滅 活菌苗的安全性好等優點，但是，亞單位苗的抗原成分單一，對其他血清型的保護作用有限。范紅結等研制 的鏈球菌重組亞單位疫苗能對馬鏈球菌獸疫亞種和豬鏈球菌2型提供較好的保護，但目前國內豬鏈球菌病 病原以豬鏈球菌2型為主，其它型豬鏈球菌也占了一定比例，而馬鏈球菌獸疫亞種比例則越來越小。因此， 預防豬鏈球菌2型和其它型豬鏈球菌越來越重要。

鑒于此，本發明著手于豬鏈球菌2型新型免疫保護性抗原的研究，尋找幾種免疫保護效果好，并且在 豬鏈球菌2型以外的其它豬鏈球菌血清型中廣泛存在的免疫原性蛋白，進而組合成有效的豬鏈球菌亞單位 疫苗。

發明內容

本發明的目的是獲得具有很好適用于豬鏈球菌2型的免疫原性蛋白，通過對編碼該基因的序列的克 隆、表達，進一步驗證其功能，并制備一種能抵抗豬鏈球菌2型的亞單位疫苗。

解決本發明的核心技術方案是：克隆報道的HP0197、HP1036和Enolase基因；通過大腸桿菌表達， 制備對豬鏈球菌2型有免疫原性的抗原蛋白，進而制備一種豬鏈球菌2型亞單位疫苗。另外，本發明還包 括所述重組大腸桿菌及其分泌的抗原蛋白在制備豬鏈球菌2型亞單位疫苗中的用途。

本發明將報道的HP0197、HP1036和Enolase基因轉移到大腸桿菌BL21中，分泌該抗原蛋白的大腸桿 菌已于2008年10月9日送交湖北省武漢市武漢大學內的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏具體保 藏信息如下：

1、大腸桿菌(Escherichia?coli)BL21/pET-28a-0197，保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)， 保藏編號為CCTCC?NO：M208146(在申請號為2008102253466申請案的母體專利中已經公開，其公開號為： CN101412984)。