技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于蔬菜抗病分子標(biāo)記育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甜瓜枯萎病抗性基因Fom-2功能性分子標(biāo)記及其應(yīng)用，從而為甜瓜枯萎病抗性的標(biāo)記輔助選擇提供一種新型分子標(biāo)記。
背景技術(shù)
甜瓜(Cocumis?melo?L.)作為葫蘆科(Cucurbitaceae)植物中一種重要的園藝作物，具有較高的商業(yè)品價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。近年來隨著甜瓜種質(zhì)資源商品化和種植面積的不斷擴(kuò)大，病蟲害發(fā)生日益嚴(yán)重，迫使生產(chǎn)上大量使用化學(xué)試劑，嚴(yán)重影響了甜瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)(Sherf?and?MacNab?1986)。其中甜瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌導(dǎo)致的一種世界范圍內(nèi)毀滅性的土傳病害，導(dǎo)致甜瓜90％以上的經(jīng)濟(jì)損失(Leach?JG1938；Martyn?RD?1987)。目前已經(jīng)鑒定分離得到4種枯萎病菌生理小種，分別為生理小種0，1，2和1-2。遺傳分析表明，2個(gè)獨(dú)立的基因Fom-1和Fom-2分別控制對(duì)生理小種0，2和0，1的抗性(Risser?et?al.1976；Risser?and?Mas?1965；Robinson?et?al.1976)。其中Fom-2基因已經(jīng)通過圖位克隆的方法得到分離(Joobeur?et?al.2004)。Fom-2基因?qū)儆贜BS-LRR類的R基因，這類基因編碼NBS(nucleotide?binding?site，NBS)和LRR(leucine-richrepeat，LRR)兩個(gè)比較保守的結(jié)構(gòu)域。通常植物專化抗性是由于宿主對(duì)抗性蛋白產(chǎn)生的無毒基因的識(shí)別，進(jìn)而引發(fā)一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)和防御反應(yīng)(Hammond?Kosack?and?Jones?1997；Martin?et?al.2003)。植物的R基因不斷變化來識(shí)別產(chǎn)生變異的無毒基因，這有利于人們?cè)诜肿铀缴习l(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)自然選擇。現(xiàn)在人們已從許多物種中克隆得到R基因，并驗(yàn)證了它們?cè)诳剐院筒豢共牧祥g的功能多樣性。許多研究表明擬南芥和其他幾個(gè)物種R基因存在序列的多態(tài)性，這種種間或種內(nèi)影響表型的基因序列多態(tài)性的識(shí)別有利于功能性分子標(biāo)記的發(fā)展(Andersen?and?Lubberstedt，2003)。
目前培育優(yōu)良抗枯萎病甜瓜品種成為解決甜瓜枯萎病害問題的有效途徑之一，分子輔助選擇(MAS)手段的發(fā)展能大大縮短甜瓜枯萎病抗性育種進(jìn)程。但目前抗病育種過程中所使用的分子標(biāo)記與目標(biāo)基因存在一定遺傳距離，易發(fā)生重組交換而分離，從而影響選擇的準(zhǔn)確性。
功能性分子標(biāo)記是與表型相關(guān)的功能基因基序中功能性單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)開發(fā)而成的新型分子標(biāo)記，功能性分子標(biāo)記的開發(fā)首先需要鑒定出群體中與表型相關(guān)的功能基因的功能性基序的序列。AS-PCR和CAPS方法已成功應(yīng)用于基于SNPs的一系列功能性分子標(biāo)記的開發(fā)(Chiapparino?et?al.2004；Kim?et?al.2006；Yeam?et?al.2005)。功能性分子標(biāo)記不需要復(fù)雜昂貴的儀器設(shè)備或繁瑣的操作步驟，因此非常適合應(yīng)用于分子育種過程。隨著越來越多的功能基因及其等位基因的分離和注釋，功能性分子標(biāo)記已成為一類新型分子標(biāo)記，可以大大提高標(biāo)記的效率。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種與甜瓜枯萎病抗性基因Fom-2相關(guān)的功能性分子標(biāo)記，其適用于甜瓜的抗枯萎病的輔助選擇。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種用于甜瓜枯萎病抗性鑒定的功能性分子標(biāo)記，
該分子標(biāo)記所采用的CAPS引物序列為以下任意一種：
CAPS1：正向引物為5’-TGCTCCTTTGGCTTCCTGT-3’(SEQ?ID?NO：3)
反向引物為5’-GAGTCTATTGTTTCGCTTCA-3’(SEQ?ID?NO：4)，
CAPS2：正向引物為5’-GGAAGTGAGGTGTTGAATT-3’(SEQ?ID?NO：5)
反向引物為5’-TACACATTGGTCCGTTAGAC-3’(SEQ?ID?NO：6)，
CAPS3：正向引物為5’-AGACGTAGCATTGCTTCTCTAG-3’(SEQ?ID?NO：7)
反向引物為5’-TGGCATCCTTCAGCACCTTC-3’(SEQ?ID?NO：8)；
或者，該分子標(biāo)記所采用的AS-PCR引物序列為：
AS-PCR：正向引物為5’-GTGTAACACAAATTCCTCAACA-3’(SEQ?ID?NO：9)
反向引物為5’-GACGTAGCATTGCTTCTGTAGA-3’(SEQ?ID?NO：10)。
