[發(fā)明專(zhuān)利]神經(jīng)組織基質(zhì)源性組織工程支架材料的制備及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010147529.8
• 申請(qǐng)日: 2010-04-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102218160A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧世璧;王玉;彭江;趙喆;黃靖香;張莉;許文靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 盧世璧
• 主分類(lèi)號(hào): A61L27/38
• 分類(lèi)號(hào): A61L27/38;A61L29/00;A61L29/04
• 代理公司: 北京君尚知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11200
• 代理人: 李稚婷

1.一種神經(jīng)組織基質(zhì)源性組織工程支架材料的制備方法，包括如下步驟：

1-1.以神經(jīng)組織為原料，在去除神經(jīng)周?chē)闹竞徒Y(jié)締組織后進(jìn)行低滲漂洗；

1-2.在含有蛋白酶抑制劑的緩沖液中將神經(jīng)組織機(jī)械粉碎為小塊；

1-3.對(duì)神經(jīng)組織小塊進(jìn)行藥物膨脹，然后低滲漂洗去除藥物；

1-4.在蛋白酶抑制劑存在的條件下用細(xì)胞裂解液處理，隨后用緩沖液漂洗；

1-5.DNA酶和RNA酶消化一段時(shí)間；

1-6.加入尿素溶液中浸泡，隨后再次進(jìn)行機(jī)械粉碎；

1-7.離心去除未溶解物質(zhì)，上清液經(jīng)透析除去尿素得到神經(jīng)基質(zhì)源性漿料。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在步驟1-7后將神經(jīng)基質(zhì)源性漿料冷凍干制得神經(jīng)基質(zhì)源性粉末。

3.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟1-2和1-4中所述蛋白酶抑制劑是指終濃度為0.005％～0.1％的苯甲基磺酰氟和0.01％～1％的乙二胺四乙酸。

4.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1-3是將神經(jīng)組織小塊浸泡于pH3-5的檸檬酸鹽緩沖液，4℃條件下持續(xù)振蕩24～72小時(shí)，然后用無(wú)菌蒸餾水漂洗多次。

5.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟1-4中所述的細(xì)胞裂解液是含有0.5％～2％Triton?X-100的6-14mM?pH7.19-9.10的Tris-HCL緩沖液，在細(xì)胞裂解液中4℃條件下持續(xù)振蕩24～72小時(shí)，然后離心，沉淀用磷酸緩沖液漂洗多次。

6.一種神經(jīng)組織基質(zhì)源性三維多孔取向支架的制備方法，將權(quán)利要求1制備的神經(jīng)基質(zhì)源性漿料單獨(dú)或與其它有機(jī)高分子材料一起制成懸液注入模具，或者將權(quán)利要求2制備的神經(jīng)基質(zhì)源性粉末單獨(dú)或與其它有機(jī)高分子材料一起制成懸液注入模具，冷凍干燥后將支架從模具中取出，進(jìn)行交聯(lián)，得到三維多孔取向支架.

7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

2-1.將神經(jīng)基質(zhì)源性漿料或神經(jīng)基質(zhì)源性粉末的乙酸溶液?jiǎn)为?dú)注入模具，或者配以其它天然的或人工合成的有機(jī)高分子材料一起制成懸液注入模具；

2-2.將模具先垂直放置在-20℃～-160℃的冷凍金屬板上預(yù)凍，完全凍結(jié)后于-40℃放置至少24小時(shí)；

2-3.轉(zhuǎn)移到真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥；

2-4.室溫下平衡溫度后，將凍干支架從模具中取出，先采用紫外線交聯(lián)，再采用碳化二亞胺或京尼平交聯(lián)；

2-5.洗去交聯(lián)劑，再次冷凍干燥后Co⁶⁰消毒，密封保存。

8.一種神經(jīng)組織基質(zhì)源性神經(jīng)再生導(dǎo)管的制備方法，將權(quán)利要求2制備的神經(jīng)基質(zhì)源性粉末加入六氟異丙醇中溶解或加入聚氧化乙烯中制備懸液，單獨(dú)或者再混以其它有機(jī)高分子材料，利用電紡絲儀器制備成有序或無(wú)序的薄膜，將該薄膜交聯(lián)后或直接纏繞在不同直徑規(guī)格的涂有聚乙二醇的軸上，制備出不同直徑的神經(jīng)再生導(dǎo)管。

9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，對(duì)于單純采用神經(jīng)基質(zhì)源性粉末材料形成的電紡絲薄膜，先進(jìn)行紫外線交聯(lián)，再采用碳化二亞胺或京尼平交聯(lián)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1～9的方法制備的神經(jīng)組織基質(zhì)源性組織工程用產(chǎn)品。