[發(fā)明專利]一種調(diào)節(jié)生物體內(nèi)微小核糖核酸含量的方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010146339.4
• 申請日: 2010-04-13
• 公開（公告）號: CN102218144A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾科;張辰宇;張峻峰;李海進(jìn)
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇命碼生物科技有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K45/00;A61P35/00;A61P31/00;A61P31/16;A61P31/14;A61P31/20;A61P31/18;A61P31/04;A61P31/06;A61P3/04;A61P3/10;A61P29/00
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

1.一種調(diào)節(jié)生物體內(nèi)微小核糖核酸含量的方法，該方法包括以下步驟：

(1)調(diào)節(jié)供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子中的微小核糖核酸的含量；

(2)分離供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子；

(3)將分離的細(xì)胞微粒子引入生物體內(nèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子的來源選自體液，優(yōu)選為血液；細(xì)胞培養(yǎng)物；和組織中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述調(diào)節(jié)供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子中的微小核糖核酸的含量步驟為增加或減少供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子中的微小核糖核酸的表達(dá)量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述增加供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子中的微小核糖核酸的表達(dá)量的方法為施加外源性刺激和/或?qū)胛⑿『颂呛怂崆绑w。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述施加外源性刺激包括以下步驟：在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中加入一種或多種能夠影響細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、代謝情況、生活周期和功能的外源性刺激物，例如激素、細(xì)胞因子、脂多糖、自由脂肪酸、高級糖基化終產(chǎn)物和過氧化氫，然后孵育。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述導(dǎo)入微小核糖核酸前體包括以下步驟：采用脂質(zhì)體載體將相應(yīng)的微小核糖核酸前體導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，然后孵育。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述減少供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子中的微小核糖核酸的表達(dá)量的方法為施加外源性刺激和/或?qū)胛⑿『颂呛怂岬姆戳xRNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述施加外源性刺激包括以下步驟：在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中加入一種或多種能夠影響細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、代謝情況、生活周期和功能的外源性刺激物，例如激素、細(xì)胞因子、脂多糖、自由脂肪酸、高級糖基化終產(chǎn)物和過氧化氫，然后孵育。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述導(dǎo)入微小核糖核酸的反義RNA包括以下步驟：采用脂質(zhì)體載體將相應(yīng)的微小核糖核酸的反義RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，然后孵育。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述分離供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子的方法選自差速離心法、免疫吸附法和超濾法中的一種或多種。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述差速離心法包括以下步驟：

(1)將細(xì)胞培養(yǎng)物或組織，或者體液以300g的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，取上清；

(2)將上清以1500g的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，取上清；

(3)將上清以10000g的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，取上清；

(4)將上清以110000g的轉(zhuǎn)速離心70分鐘，沉淀即供體細(xì)胞細(xì)胞微粒子。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述免疫吸附法包括以下步驟：

(1)將細(xì)胞培養(yǎng)物或組織，或者體液以3000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，取上清；

(2)將上清置于吸附細(xì)胞特異性抗體或免疫磁珠的組織培養(yǎng)皿上溫育30～60分鐘，回收被吸附的細(xì)胞微粒子。

13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述超濾法包括以下步驟：

(1)將細(xì)胞培養(yǎng)物或組織，或者體液以3000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，取上清；

(2)將上清置于帶有100KD濾膜的濃縮離心管中，在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心、濃縮即得。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述生物體選自人；動物，例如軟骨魚、硬骨魚、兩棲動物、爬行動物、鳥類和哺乳類；微生物，例如細(xì)菌、螺旋體、支原體、立克次體、衣原體、放線菌和病毒中的一種或多種。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述病毒選自DNA病毒和RNA病毒，例如乙肝病毒、天花病毒、炭疽病毒、艾滋病病毒、SARS病毒和流感病毒中的一種或多種。

16.一種預(yù)防和/或治療疾病的方法，該方法包括采用根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的方法來調(diào)節(jié)人或動物體內(nèi)與疾病相關(guān)的微小核糖核酸的含量。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述微小核糖核酸的含量增加或減少與疾病發(fā)生和/或發(fā)展相關(guān)。