[發明專利]一種用原位合成制備蛋白質芯片的方法

無效

• 申請號: 201010146013.1
• 申請日: 2010-04-13
• 公開（公告）號: CN101813701A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 王巍
• 申請（專利權）人: 無錫中美億芯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/327;B81C1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在于，包括如下具體 步驟：

a)制備帶有生物活性單元的苯胺衍生物單體

將帶有生物活性單元的甘醇亞磷酰胺溶解在無水乙腈中，然后加入苯胺衍 生物的無水乙腈溶液，其中：帶有生物活性單元的甘醇亞磷酰胺與苯胺衍生物 的摩爾比為10：1～1：10；加入適量5-乙硫基四氮唑（ETT）活化劑，使形成 的活化劑無水乙腈溶液的濃度為0.25mol/L；在室溫下攪拌20～40分鐘后，進 行減壓蒸餾至粉末狀；加入過量氧化溶液，所述氧化溶液是由單質碘溶于四氫 呋喃：水：三乙胺=8：1：1的混合溶劑中形成，溶液的質量百分比濃度為4%； 室溫下攪拌5～15分鐘后，以硫代硫酸鈉還原至中性，然后減壓蒸出四氫呋喃， 以氯仿萃取，有機層經無水硫酸鈉干燥后，減壓蒸干有機溶劑；最后加入10 ％氫氧化銨脫保護，減壓蒸出過量氨氣后以0.2M鹽酸中和至中性，放入-4℃ 冰箱備用；所述的苯胺衍生物是指通式為：其中的n為1、 2或3；其中的R2是氫；

b)制備蛋白質芯片

將微電極陣列建立在獨立尋址的邏輯電路芯片上，此電路上的每個電極由 互補金屬氧化物半導體(CMOS)晶體管的開關連接，通過發送電子地址信號到 共同結點電路進而到與每個電極相關的靜態隨機存取記憶體（SRAM）導通該 開關；微電極陣列放置在一個流體反應器中，反應器中的反應液為步驟a)制備 得到的帶有生物活性單元的苯胺衍生物單體與其摩爾量的1～10倍的苯胺及 適量作為電解質的氯化鉀混合而成；在邏輯電路控制下，以10毫秒開，10毫 秒關的脈沖，在0.5～1.5伏，30秒總時間內，具有生物活性并導電的電極覆 蓋物在原位迅速生成，經去離子水清洗后用氮氣吹干，與帶有熒光的卵白素在 PBS緩沖液中培養1～3小時，用PBS緩沖液反復沖洗后即得。

2.根據權利要求1所述的用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在 于，所述的帶有生物活性單元的甘醇亞磷酰胺是指生物素甘醇亞磷酰胺。

3.根據權利要求1所述的用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在 于，所述電極是金屬、金屬合金、碳納米管、玻璃碳、石墨、摻雜氧化物、銦 錫氧化物、氧化硅、砷化鎵半導體、金屬摻雜聚合物或陶瓷材料。

4.根據權利要求3所述的用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在 于，所述電極是金屬。

5.根據權利要求4所述的用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在 于，所述金屬選自鉑、銥、鈀、金、銀、銅、汞、鎳、鋅、鈦、鎢或鋁。

6.根據權利要求5所述的用原位合成制備蛋白質芯片的方法，其特征在 于，所述金屬選自鉑。