[發(fā)明專利]從曼地亞紅豆杉枝葉中同時提取紫杉醇和10-DABⅢ的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010145926.1
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號: CN102212045A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設計）人: 徐志明;張新鳳;史小娟;付順華;斯金平
• 申請（專利權）人: 常山曼地亞紅豆杉科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種從植物枝葉中分離提取天然有機化合物的方法，具體地說是一種從曼地亞紅豆杉枝葉中同時提取紫杉醇和10-DAB?III的方法。

背景技術

紫杉醇和10-DAB?III(10-去乙酰基巴卡亭III)均是從紅豆杉中分離出的天然有機化合物。紫杉醇是一種四環(huán)二萜的化合物，是一種治療進行性卵巢癌、乳腺癌、白血病及其它癌癥的天然藥物，同時也是唯一促進微管蛋白凝聚并不可逆解聚的天然新型抗腫瘤特效藥。10-DAB?III是紫杉醇的前體物。我國自1984年起就開始了紅豆杉和紫杉醇制備的研究工作，最早是從西藏的喜馬拉雅密葉紅豆杉中提取得到紫杉醇，并得到抗癌活性與紫杉醇相當?shù)男律飰A三類杉寧堿，此外還有10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基三尖杉寧堿、1q-羥基巴卡丁III和1B-羥基巴卡I?III等，均有抗癌活性。但是在紅豆杉中分離得到的許多紫杉烷類二萜類化合物和生物堿中，活性最強的是紫杉醇。但是，該化合物在紅豆杉植物中含量極低，大約在0.001％-0.076％之間，并且提取困難。長期以來較為常用的從紫杉屬植物中提取制備紫杉醇方法，其工藝路線一般為：浸出(或超聲波或微波提取)——脫脂——萃取得到粗提物——2-3次工業(yè)色譜分離——結晶——溴化——正相色譜分離——重結晶得到產(chǎn)品，并在此基礎上發(fā)展了許多改進工?藝。但是，這些現(xiàn)有工藝均存在一個缺陷，即一次提取只能得到一個產(chǎn)品，如得到紫杉醇或者得到10-DAB?III后，通過半合成的方法得到紫杉醇。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的：發(fā)明一種簡單、快速、準確地從曼地亞紅豆杉枝葉中同時提取紫杉醇和10-DAB?III的方法。

本發(fā)明的目的可通過以下技術方案來實現(xiàn)：

(1)將曼地亞紅豆杉枝葉50℃烘干干燥后，粉碎成80目——120目的粉末，每5克干粉用80mL-120mL毫升甲醇進行提取，重復三次，過濾，合并3次的甲醇提取液；

(2)將甲醇提取液減壓濃縮，用正己烷萃取除雜后，再用二氯甲烷萃取，最后合并二氯甲烷萃取液，二氯甲烷部分就是含有紫杉醇和10-DAB?III的溶液；

(3)將二氯甲烷萃取液減壓濃縮后，用色譜級的甲醇定溶，并進行HPLC含量測定。

本發(fā)明利用曼地亞紅豆杉的枝葉資源，既提取紫杉醇，又提取10-DABIII，提高了提取速度，而且也提高了提取效果，方法簡單可靠。

具體實施方式

下面結合實施例，對發(fā)明作進一步描述。

試驗所用材料：曼地亞紅豆杉的枝葉，50℃烘干樣品，粉碎成100目的粉末。

試驗用試劑：分析純甲醇、正己烷，二氯甲烷，(天津市永大化學試劑開發(fā)中心)，色譜純甲醇和乙腈，水為超純水。

試驗用儀器：KS-600E?I型超聲波清洗機由(寧波海曙科生超聲設備有限公司)，Buchi?R-210旋轉蒸發(fā)儀，HPLC檢測使用Waters?2487雙波長檢測器，Waters?515泵，7725I進樣閥，HS?2000色譜數(shù)據(jù)處理軟件，Milli-Q超純水儀。HPLC色譜條件：symmetry?C?18反相柱，250mm×4.6mm粒度5μm，柱溫：30℃，流動相：甲醇∶水＝65∶35，乙腈∶水＝30∶70，流速：0.8mL·min^-1；柱溫30℃；檢測波長UV：227nm和234nm；進樣體積：10μL。

實施例一

采集曼地亞紅豆杉枝葉后，置于50℃烘箱內(nèi)烘干，粉碎成100目的干粉，稱取5g，加入100mL甲醇，超聲處理40min，靜置過濾，濾渣再以100mL的甲醇超聲40min，如此重復3次，合并3次的甲醇提取液，在旋轉蒸發(fā)儀中，50℃水浴，-0.09Mpa的真空下，減壓回收甲醇至干。

HPLC檢測甲醇提取液中的紫杉醇和10-DAB?III的含量：減壓回收甲醇至干后加入18mL的甲醇和2mL的水，用正己烷萃取色素等脂溶性雜質(zhì)數(shù)次，棄去正己烷溶液后，甲醇液濃縮至干，再用二氯甲烷與水萃取數(shù)次，合并二氯甲烷萃取液，于旋轉蒸發(fā)儀中40℃水浴，-0.03Mpa真空度，減壓蒸干二氯甲烷。剩余物用色譜級甲醇溶解，定溶25mL，HPLC檢測紫杉醇和10-DAB?III的含量為0.177mg·g^-1和0.121mg·g^-1。

實施例二