[發明專利]具有改變特性的α-淀粉酶突變體

無效

• 申請號: 201010145645.6
• 申請日: 2001-07-12
• 公開（公告）號: CN101857858A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 托馬斯·西斯特德;索倫·杰魯爾夫;卡斯滕·安德森;克勞斯·C·富格爾桑
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/28
• 分類號: C12N9/28;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C11D3/386;C12P19/14;C12P7/06;D06M16/00;C12S11/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

1.一種親本Termamyl樣α-淀粉酶的變體，所述變體包含位點207的改變：

其中

(a)所述改變分別是

(i)在緊鄰該位點的氨基酸下游的氨基酸插入，

(ii)占據該位點的氨基酸的缺失，或

(iii)以不同的氨基酸取代占據該位點的氨基酸，

(b)變體具有α-淀粉酶活性，和

(c)每個位點相應于具有SEQ?ID?NO：8所示的氨基酸序列的親本Termamyl樣α-淀粉酶的氨基酸序列的位點。

2.權利要求1所述的變體，其中該變體具有下述的突變：

D207V，L，G；使用SEQ?ID?NO：8的編號。

3.權利要求1或2所述的變體，其中該變體具有下述的突變：K170Q+D207V+N280S；E132A+D207V；D207V+L318M；D60N+D207V+L318M；T49I+K176R+D207V+Y402F；使用SEQ?ID?NO：8的編號。

4.權利要求1-3中任一項所述的變體，其中親本Termamyl樣α-淀粉酶具有SEQ?ID?NO：8所示氨基酸序列且衍生于地衣芽孢桿菌的菌株，親本Tcrmamyl樣α-淀粉酶具有SEQ?ID?NO：10所示氨基酸序列且衍生于解淀粉芽孢桿菌的菌株，親本Termamyl樣α-淀粉酶具有SEQ?ID?NO：6所示氨基酸序列且衍生于嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌株。

5.權利要求1-4中任一項所述的變體，其中親本Termamyl樣α-淀粉酶是：LE174；LE174+G48A+T49I+G107A+I201F；LE174+M197L；或LE174+G48A+T49I+G107A+M197L+I201F。

6.權利要求1中所述的變體，其中該變體在下述位點發生突變：X212V，L，G；使用SEQ?ID?NO：4的編號。

7.權利要求1或6中所述的變體，該變體具有下述的突變：E212V+N285S；D134A+E212V；E212V+X323M；D62N+E212V+X323M；T51I+K179R+E212V+Y404F；或N195F+X212V+K269S，使用SEQ?ID?NO：4的編號。

8.權利要求1-7中任一項所述的變體，其中親本Termamyl樣α-淀粉酶選自：SP690(SEQ?ID?NO：2)；SP722(SEQ?ID?NO：4)；AA560(SEQ?ID?NO：12)；#707α-淀粉酶(SEQ?ID?NO：13)；和KSM-AP1378。

9.權利要求1-8中任一項所述的變體，其中親本Termamyl樣α-淀粉酶是下述任何一種：SP722+D183*+G184*；SP722+D183*+G184*+N195F；SP722+D183*+G184*+M202L；SP722+D183*+G184*+N195F+M202L；BSG+I181*+G182*；BSG+I181*+G182*+N193F；BSG+I181*+G182*+M200L；BSG+I181*+G182*+N193F+M200L；AA560+D183*+G184*；AA560+D183*+G184*+N195F；AA560+D183*+G184*+M202L；和AA560+D183*+G184*+N195F+M202L。

10.權利要求1-9中任一項所述的變體，其中親本Termamyl樣α-淀粉酶由核酸序列編碼，該核酸序列與SEQ?ID?NO：7的核酸序列可在低嚴謹度條件下、中度嚴謹度條件下或高嚴謹度條件下雜交。

11.權利要求1-10中任一項所述的變體，其中變體在70-120℃高溫和/或pH?4-6的低pH條件下具有改變的穩定性。

12.一種DNA構建體，包含編碼權利要求1-11中任一項所述的α-淀粉酶變體的DNA序列。

13.一種重組表達載體，其攜帶權利要求12的DNA構建體。

14.一種由權利要求12的DNA構建體或權利要求13的載體轉化的細胞。

15.權利要求14的細胞，其是微生物。

16.權利要求15的細胞，其是細菌或真菌。