[發明專利]一種視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型的制作方法

無效

• 申請號: 201010145338.8
• 申請日: 2010-04-07
• 公開（公告）號: CN101849860A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 沈麗君;陳亦棋;吳煒
• 申請（專利權）人: 溫州醫學院
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00
• 代理公司: 溫州甌越專利代理有限公司 33211
• 代理人: 李友福

技術領域

本發明涉及一種為實驗醫學中用于手術治療視網膜靜脈阻塞性疾病的研究的活體動物眼模型制作方法，具體是視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型的制作方法。

背景技術

視網膜分支靜脈阻塞(Branch?Retinal?Vein?Occlusion，BRVO)是繼糖尿病性視網膜病變后第二種常見的引起視力損害的視網膜血管性疾病，嚴重者可導致失明，一直是眼底病領域的研究重點。一般認為，該病是由于視網膜靜脈內血栓形成引起視網膜靜脈回流所致，但具體原因和病理機制尚不完全清楚。目前臨床上常用的視網膜激光光凝和玻璃體切除手術治療僅著眼于分支靜脈阻塞后的缺血缺氧并發癥，非對因治療。而近年中出現的一些新治療方法如激光血管脈絡膜吻合術、靜脈穿刺溶栓術等其實際療效仍有待進一步證實。

視網膜中央血管系統與心臟冠狀血管系統有相似之處，缺乏吻合支，一旦阻塞后循環障礙很難改善。臨床上可通過冠脈血管搭橋手術治療心肌缺血，那么理論上也可通過視網膜靜脈人工血管旁路術來治療視網膜分支靜脈阻塞。人工血管旁路術在臨床上已應用多年，主要治療肢體大血管阻塞和心臟血管阻塞、畸形。由于視網膜纖細的血管管徑(視網膜動脈管徑小于0.1mm，視網膜靜脈管徑小于0.2mm)，人工血管的材料和眼球內狹小的操作空間(約直徑25mm的球形空間)等原因，極大地限制了眼內視網膜血管超顯微手術的研究和發展。

發明內容

本發明的目的在于為用于研究視網膜靜脈人工血管旁路術治療視網膜分支靜脈阻塞的時機、效果、安全性及用于研究視網膜血管缺血再灌注損傷的機制和轉歸而提供一種視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型的制作方法。

為實現上述目的，本發明公開了一種視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型的制作方法，其特征在于包括以下步驟：

1)選取眼球直徑約20mm-28mm的哺乳動物作為實驗動物；

2)通過人工方法阻斷視網膜主干靜脈第一分支處血管以造成視網膜分支靜脈阻塞；

3)進行常規的眼科經鞏膜三通道玻璃體切除術；

4)分別在阻塞處遠離視盤端的一條分支靜脈上和靠近視乳頭端的主干靜脈上各設定一點作為血管旁路的起點和止點，所述起點和止點之間的距離為5mm-7mm；

5)制作人工血管：采用內徑為50um-60um，管壁厚度為5um-10um的高分子材料的纖細導管，依據主干和分支靜脈的成角設定弧度，以大于起點和止點兩點間距離3mm設定為長度，兩端剪成銳利斜面后置于肝素鈉液體浸泡；

6)將人工血管經鞏膜通道切口導入眼內，將人工血管的銳利的兩端穿刺起點和止點的血管壁，插入血管內達1.5mm長度，然后電凝穿刺處血管促進血管收縮致穿刺口閉合

7)縫合手術切口，完成視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型制作。

通過本發明的方法可以建立一種視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型，用于研究視網膜靜脈人工血管旁路術治療視網膜分支靜脈阻塞的時機及效果；用于研究視網膜靜脈人工血管旁路術的安全性；用于研究視網膜血管缺血再灌注損傷的機制和轉歸；為開展視網膜分支靜脈阻塞的一種新的臨床手術方法奠定了研究基礎。

下面將結合附圖與具體實施例對本發明作進一步說明。

附圖說明

圖1是動物眼視網膜分支靜脈阻塞后的視網膜靜脈血管分布局部解剖示意圖；

圖2是動物眼視網膜靜脈人工血管旁路術示意圖。

圖中所示：1視網膜分支靜脈阻塞點位置；2血管旁路的起點位置(視網膜分支靜脈上)；3血管旁路的止點位置(視網膜主干靜脈上)；4人工血管。

具體實施方式

本發明中視網膜靜脈人工血管旁路術的活體動物眼模型的實驗動物可以是選自豬、犬、羊、猴等哺乳動物，下面以實驗用小型豬為例介紹本發明活體動物眼模型的具體制作方法：

首先選2個月月齡的實驗用小型豬，術前連續五天給予抗凝血藥物拜阿司匹林腸溶緩釋片300mg/每日，華法林鈉片500mg/每日。在術前5-7天，以1ml注射器前房穿刺抽取0.1ml房水，于顳上象限角膜緣后2.5mm，通過30G針頭向玻璃體腔內注入0.5U/0.05ml纖溶酶和50U/0.05ml透明質酸酶，誘導完全的玻璃體后脫離，便于術中完全的切除玻璃體。接著預先用光動力學方法造成視網膜分支靜脈阻塞，具體是將孟加拉玫紅(Rose?Bengal)(美國Sigma公司產品)用生理鹽水配制成20g/L，經0.22um濾過膜過濾，4℃避光保存。于鼻上方睫狀扁平部做鞏膜穿刺，插入玻璃體切割機眼內照明的光導纖維(輸出功率10mW)。耳緣靜脈推注盂加拉玫紅液(20mg/kg)。1min后用光導纖維直接照射視網膜主干靜脈第一分支處血管，避開伴行動脈.照射10-15分鐘，直到靜脈局部白色血栓逐漸形成構成視網膜分支靜脈阻塞點1，血流被阻斷，靜脈遠端紆曲，如圖1所示。然后進行玻璃體切除術：首先對動物進行麻醉：手術前禁食24小時，禁飲2小時，麻醉前30min肌注阿托品0.5mg，肌注速眠新II?0.3ml/kg成功進行麻醉誘導后，腹腔內注射3ml/kg?10％水合氯醛麻醉劑進行全身麻醉，隨后在高放大率、雙手操作系統眼科手術顯微鏡下進行常規的眼科經鞏膜三通道玻璃體切除術。再分別在阻塞點1處遠離視盤端的一條分支靜脈上各設定一點作為血管旁路的起點2，在靠近視乳頭端的主干靜脈上設定一點作為血管旁路的止點3，起點2和止點3之間的距離為6mm。下一步是人工血管的準備：選用聚酰亞胺材料的微導管(內徑為50.8um，管壁為7.6um，美國HV?Technologies公司產品)作為人工血管，依據主干和分支靜脈的成角設定弧度，以大于起點2和止點3兩點間距離3mm設定為長度，兩端剪成銳利斜面后至于肝素鈉液體浸泡有利于抗凝血，再將人工血管經鞏膜通道切口導入眼內，用眼科25-gauge視網膜鑷夾持，先將人工血管的銳利的一端穿刺起點2點的血管壁，插入血管內達1.5mm長度，再將人工血管的另一段穿刺止點3點的血管壁，插入血管內達1.5mm長度，血管壁的自然收縮使穿刺口閉合，如圖2所示，若仍存在少量出血可以電凝穿刺處血管促進血管收縮致穿刺口閉合，縫合手術切口。為了檢驗模型的效果，接著采用術中即時眼底血管熒光造影技術，即在耳緣靜脈內快速推注10％熒光素鈉(15～30mg/kg)，馬上開始在藍色光波激發下用熒光眼底攝像機攝像，證實人工血管旁路通暢和穿刺口無滲漏，即證實動物眼模型制作成功。