[發明專利]白血病耐藥細胞膜蛋白及其作為耐藥靶蛋白的用途

無效

• 申請號: 201010144503.8
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN101891813A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 楊純正;熊冬生;任思楣;佘鳴;紀慶;王金宏;邵曉楓;楊銘;彭洪薇;李崴;顏次慧
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院血液學研究所
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12Q1/02
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 江增俊

技術領域

本發明屬于白血病耐藥性研究領域，特別是涉及白血病耐藥細胞膜蛋白及其作為耐藥靶蛋白的用途，該蛋白已知為一種剪切因子(SFPQ)，該剪切因子富含脯氨酸和谷氨酰胺。

背景技術

化療是白血病治療的主要手段，然而在化療的過程中，白血病細胞往往對化療藥物產生耐藥現象，尤其是對一系列結構及作用機制不同的藥物產生交叉耐藥，此稱為多藥耐藥。這是白血病化療失敗和復發的主要原因，因而預測和治療腫瘤多藥耐藥在白血病的治療中成為決定成敗的關鍵因素。

白血病耐藥的產生是多因素的，隨誘導藥物、細胞種類、分化階段、及細胞所處微環境的不同而表現出不同的耐藥表型。目前所發現的耐藥機制主要包括膜糖蛋白介導的藥物外排、細胞凋亡調節的改變、細胞內藥物的激活或滅活改變所引起的代謝耐藥、DNA損傷修復功能的加強、蛋白激酶C活性增加、膜轉運缺陷、細胞粘附以及通過細胞內藥物靶酶的水平改變或細胞內酶與藥物的親和力改變而導致的靶耐藥等等。由于臨床耐藥與體外腫瘤細胞耐藥表型和性質有很大差別，因而上述機制能在臨床中得到證實甚至被應用于臨床腫瘤細胞耐藥預測和治療的卻很少。目前在白血病耐藥的臨床治療方面主要以抑P-糖蛋白功能的耐藥逆轉劑為主，但其臨床效果并不理想，至今無一獲得FDA批準上市。事實上白血病患者耐藥產生并非單一機制，此外，在臨床上患者間的個體差異也為治療帶來了困難。可見發現更多的白血病耐藥相關的治療靶點以實現多靶點聯合檢測與治療是解決上述問題的對策。

抗體標記技術和流式細胞儀技術在臨床廣泛應用并已成為白血病免疫分型的診斷中不可或缺的指標。目前，流式細胞術已經能夠同時檢測十幾種細胞表面分子，為建立多靶點聯合診斷和治療耐藥提供了可能。細胞膜蛋白是抗體標記和流式細胞儀檢測的最佳靶點，其在細胞表面識別、信號轉導、酶和轉運等方面都扮演著重要的角色。血液腫瘤不同于實體瘤，其分散性特別適于以細胞膜蛋白作為靶點。

由于細胞膜蛋白的天然的疏水性和其低豐度的特點為直接分離鑒定細胞膜蛋白帶了諸多困難。新近發展的基于抗體和質譜聯合應用的方法為發現和鑒定特定靶蛋白和未知功能的新的細胞膜蛋白提供了新方法和便利手段。各種來源或功能不同狀態不同的樣本做前期處理后，經電泳或液相色譜分離，再通過免疫共沉淀技術釣取抗原，而后可供選擇的質譜方法分析和與數據庫信息比對而精確鑒定目的蛋白，逐漸成為研究新蛋白的成熟模式。

單克隆抗體因其與抗原位點特異性的結合，以及其作為與熒光標記物的載體和與毒素或放射性物質相偶聯的載體，在腫瘤靶向治療和特異性診斷中具有及其重要的應用價值，同樣也在腫瘤多要耐藥的診斷與治療中單抗也發揮著同樣重要的價值。

由于體內研究腫瘤多藥耐藥涉及醫學倫理等多方面因素，開展體內實驗非常困難。因此，大量不同組織來源的腫瘤細胞，經體外藥物選擇性作用而產生的耐藥細胞株已經成為研究多因素耐藥機制的重要模型。。

發明內容

本發明的目的是提供一種白血病耐藥細胞膜蛋白及其作為耐藥靶蛋白的用途。

本發明涉及的細胞膜表面耐藥標志蛋白，經消減免疫法制備單克隆抗體、利用單抗和免疫共沉淀技術釣取抗原、肽指紋圖譜鑒定及測序、siRNA的干擾實驗表明該抗原(細胞膜蛋白)是一種已知的蛋白，該蛋白為富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子(SFPQ)，具有本申請所附序列表(SEQ?ID?No.1)所示的基因編碼。

本發明系首次證明該蛋白表達在血液系細胞膜和腫瘤細胞膜，而且，還首次證明所述細胞膜表面標志蛋白是設計白血病抗耐藥藥物的靶蛋白，而且還涉及其作為靶蛋白的用途和用于白血病耐藥性臨床診斷試劑的應用。

本發明的優點與積極效果在于：本發明系首次證明SFPQ可以定位于血液腫瘤細胞膜表面，本發明所提供的定位于血液腫瘤細胞膜表面的相關蛋白SFPQ具有在敏感血液腫瘤細胞表面過度表達、在耐藥血液腫瘤細胞表面低表達的特性，是一種新的血液腫瘤耐藥細胞膜表面標志蛋白。因此，本發明為白血病抗耐藥新藥的設計提供了新的靶點，為白血病耐藥的診斷提供了新的診斷指標；并以此為依據，用以設計臨床診斷白血病耐藥的新的標志物和開發直接針對白血病耐藥的新藥。

附圖說明

圖1是單克隆抗體5D12與敏感HL60細胞和耐藥的HL60/ADR細胞總蛋白差異結合的免疫印跡的照片。