[發明專利]油菜莖基潰瘍病菌的PCR檢測方法及檢測用引物有效
| 申請號： | 201010142440.2 | 申請日： | 2010-04-08 |
| 公開（公告）號： | CN101805793A | 公開（公告）日： | 2010-08-18 |
| 發明（設計）人： | 易建平;尚琳琳;周國梁 | 申請（專利權）人： | 中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海浦一知識產權代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 200135 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 油菜 潰瘍 病菌 pcr 檢測 方法 引物 | ||
1.一種油菜莖基潰瘍病菌的PCR檢測方法，其特征在于，包括如下 步驟：
(1)設計引物，該引物的序列為：
Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ?ID?NO.1)；
Lmb4：5’-aggcgagtcccaagtggaaca-3’(SEQ?ID?NO.2)；
(2)收集菌絲并提取DNA；
(3)采用步驟(1)設計的引物進行PCR檢測；所述PCR檢測的反應 體系為30μL，包括3μL10×PCR?Buffer、3μL?dNTP、3μL?MgCl2、步驟
(1)上下游引物各0.5μL、1μL模板DNA、1U?Taq聚合酶，加無菌水 補至30μL；所述PCR檢測的反應程序為：94℃預變性3min；然后以 94℃30s，56℃30s，72℃40s擴增30個循環；最后72℃延伸5min。
2.如權利要求1所述的油菜莖基潰瘍病菌的PCR檢測方法，其特征 在于，步驟(2)中，所述收集菌絲并提取DNA具體為：菌株用PDA培 養基繁殖后收集菌絲，液氮研磨后取菌絲粉，用植物基因組提取試劑盒提 取DNA。
3.一種用于檢測油菜莖基潰瘍病菌的引物，其特征在于，其序列為：
Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ?ID?NO.1)；
Lmb4：5’-aggcgagtcccaagtggaaca-3’(SEQ?ID?NO.2)。
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