[發(fā)明專利]源自膠原蛋白的抗氧化肽及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010141974.3
• 申請日: 2006-03-31
• 公開（公告）號: CN101824071A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李博;籍保平;陳峰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K5/10
• 分類號: C07K5/10;C07K7/06;C12P21/02;A61K38/07;A61K38/08;A61K8/64;A61P39/06;A23L1/305;A23K1/16;A61Q19/00
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

本申請是申請日為2006年3月31日、申請?zhí)枮?00610066895.4、發(fā)明名稱為“源自膠原蛋白的抗氧化肽及其用途”的發(fā)明專利申請的分案申請。?

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一系列源自膠原蛋白的抗氧化肽，和其作為抗氧化劑的用途。?

背景技術(shù)

丁基羥基茴香醚(BHA)和2，6-二叔丁基對甲酚(BHT)等化學合成的抗氧化劑通常作為食品添加劑用在食品工業(yè)上，用于防止食品的氧化變色或者因氧導致的品質(zhì)劣變。然而這些合成抗氧化劑由于對健康的潛在危害，在食品上的應(yīng)用越來越受到限制。在最近的二十年里，人們把目光轉(zhuǎn)向來自于動植物的天然的、安全的抗氧化劑。天然抗氧化劑不僅能夠防止食品中油脂體系的氧化，而且可以防止人體內(nèi)自由基的危害，延緩衰老導致的各種退化性疾病，如癌癥、冠心病、糖尿病等等。已有一些報道發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的水解物具有一定的抗氧化性。例如，在中國專利CN200510009423.0中公開了一系列源自蜂王漿的抗氧化肽，其為通過將蜂王漿用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶進行酶處理，可以獲得具有和維生素E同等程度的強抗氧化能力的抗氧化肽。但是這類天然抗氧化劑的原料來源非常有限，不利于它的廣泛使用。?

在文獻1：《生物化學和分子生物學雜志》(2001)中，描述了采用系列酶解法，順序添加堿性蛋白酶(Alcalase)、鏈霉蛋白酶E(pronase?E)和膠原酶(collagenase)，在一個三步法循環(huán)膜反應(yīng)器中進行水解，從牛皮中分離出三個含有9或10個氨基酸殘基的抗氧化肽PI(Gly-Glu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Ala-Hyp)，PII(Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly)和PIII(Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp)。在文獻2：J.Agric.Food?Chem.2001，49，1984～1989中，公開了采用同樣的系列酶解法，從阿拉斯加鱈魚魚皮中水解、分離出兩個含有16和13個氨基酸殘基的抗氧化肽P1(Gly-Glu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly)和P2(Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly)。但是這些分離出的抗氧化肽的氨基酸殘基的分子量比較大，在胃腸道中容易被消化系統(tǒng)的胃蛋白酶、胰蛋白酶及小腸蛋白酶進一步水解，失去抗氧化活性。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)分離的天然抗氧化劑(抗氧化肽)的氨基酸殘基的分子量比較大，在胃腸道中容易被消化系統(tǒng)的胃蛋白酶、胰蛋白酶及小腸蛋白酶進一步水解，失去抗氧化活性的缺陷，從而提供一系列分子量小、抗氧化性活性較高的源自膠原蛋白的抗氧化肽，和其作為抗氧化劑的用途。?

本發(fā)明的目的是通過如下的技術(shù)方案實現(xiàn)的：?

本發(fā)明提供一系列源自膠原蛋白的抗氧化肽，其具有如下之一的氨基酸序列：?

(1)Hyl-Cys?

(2)Gln-Gly-Ala-Arg?

(3)Leu-Gln-Gly-Met?

(4)Leu-Gln-Gly-Met-Hyp?

本發(fā)明提供的上述源自膠原蛋白的抗氧化肽可以通過多肽儀化學方法合成，也可以通過將膠原蛋白水解，然后將獲得的水解產(chǎn)物分離純化而得。?

本發(fā)明提供的上述源自膠原蛋白的抗氧化肽可通過如下的方法水解得到：?

1)使用蛋白酶對膠原蛋白進行一次或連續(xù)幾次的水解，得到含有多種抗氧化肽的混合物的前制品；?

使用蛋白酶對膠原蛋白進行水解的條件視蛋白酶的活力和種類而定，以便生成足夠量的抗氧化肽，具體步驟為：在20～45℃(優(yōu)選25～37℃)，將膠原蛋白與水混合，使得膠原蛋白在混合液中的重量百分比為2～8wt％，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)膠原蛋白水溶液的pH值至2.0～8.0，然后加入蛋白酶，進行水解反應(yīng)24～72小時(優(yōu)選36～48小時)，最后對混?合液進行預處理以停止酶解反應(yīng)；?

所述的水優(yōu)選純凈水、去離子水、或蒸餾水；?

所述的膠原蛋白和蛋白酶的重量比為50～2500∶1；?

所述的膠原蛋白可以是任何來源的膠原蛋白，優(yōu)選使用豬、牛、雞、魚的膠原蛋白的提取物、粗制品、明膠等各種形式的制品；?