[發(fā)明專利]具有抑制內(nèi)皮細胞生長活性的重組EDI-8t蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010141615.8
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號: CN102212126A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周慶瑋;甘人寶;杜鵬;錢悅;張倩;馮寶山;丁紅珍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海普洛康裕藥物研究院有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12P21/02;A61K38/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程藥物領(lǐng)域，具體涉及重組內(nèi)皮細胞生長抑制劑，其基因工程表達及臨床應(yīng)用。

背景技術(shù)

膠原蛋白(Collagen)又叫膠原質(zhì)，是組成各種細胞外間質(zhì)的聚合物，是細胞外基質(zhì)最重要的組成成份，同時也是動物結(jié)構(gòu)組織最主要的構(gòu)造性蛋白質(zhì)，主要是以不溶性纖維蛋白的形式存在。在人體的組成中，膠原蛋白約占蛋白質(zhì)總量的33％，能保證并連結(jié)各種組織支撐起人體的結(jié)構(gòu)。

近年來，膠原蛋白來源的血管生長抑制研究正正逐漸成為熱點。1997年哈佛醫(yī)學(xué)院的Folkman教授和他的團隊發(fā)現(xiàn)了第一個膠原蛋白來源的內(nèi)皮細胞生長抑制劑angiostatin(O’Reilly?MS，Holmgren?L，Shing?Y，Chen?C，Rosenthal?RA，Moses?M，Lane?WS?et?al..Cell，1994，79(2)：315-328)，隨后另一個抑制分子endostatin也被從尿液中提取(O’Reilly?MS，Boehm?T，Shing?Y，F(xiàn)ukai?N，VasiosG，Lane?WS，F(xiàn)lynn?E，Birkhead?JR，Olsen?BR，F(xiàn)olkman?J.Cell，1997，88(2)：277-285)。Angiostatin和endostatin這兩個內(nèi)皮抑制劑分子的發(fā)現(xiàn)和動物實驗的成功掀開了這個領(lǐng)域的研究熱潮。隨后一系列膠原蛋白來源的內(nèi)皮細胞抑制劑被發(fā)現(xiàn)，如來源于膠原蛋白XV的Restin(Ramchandran?R，Dhanabal?M，Volk?R，Waterman?MJ，Segal?M，Lu?H，Knebelmann?B，Sukhatme?VP.BiochemBiophys?Res?Commun，1999，255(3)：735-739)、來源于膠原蛋白IV的canstatin(Kamphaus?GD，Colorado?PC，Panka?DJ，Hopfer?H，Ramchandran?R，Torre?A，Maeshima?Y，Mier?JW，Sukhatme?VP，Kalluri?R.J?Biol?Chem，2000，275(2)：1209-1215)等。這些分子均能專一性地抑制內(nèi)皮細胞的生長，但是對正常細胞如成纖維細胞和腫瘤細胞的生長沒有抑制活性。這種通過抑制血管生成抑制實體瘤的生長的方法，為治療腫瘤提供了一種新的思路，常被形象地稱作“餓死癌細胞”的療法[Folkman?J.N?Eng?J?Med，1971，285(21)，1182-1186]。這種新思路相比以前的各種腫瘤治療方法具有許多優(yōu)點。它具有廣譜的治療范圍，對絕大多數(shù)腫瘤的生長都有效，且不容易產(chǎn)生抗藥性。目前，世界首個也是唯一一個內(nèi)皮細胞抑制劑類抗癌藥-恩度(endostatin)已在我國上市，取得了不錯的市場反應(yīng)。

然而，恩度對于內(nèi)皮細胞的抑制作用還比較有限，因此，本領(lǐng)域還需要進一步進行研究，以開發(fā)改進的藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種重組的內(nèi)皮細胞生長抑制劑，其基因工程表達及臨床應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種分離的人內(nèi)皮生長抑制蛋白-8(EDI-8t)多肽，該多肽選自下組：

(a)如SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽；

(b)將SEQ?ID?NO：2氨基酸序列經(jīng)過一個或多個(如1-20個，更佳地1-10個，更佳地1-5個，更佳地1-3個)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抑制內(nèi)皮細胞生長功能的由(a)衍生的多肽。

在一個優(yōu)選例中，該多肽是如SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列選自下組：

(a)編碼所述多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。

在一個優(yōu)選例中，該多核苷酸編碼具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列的多肽。

在另一優(yōu)選例中，該多核苷酸的序列如SEQ?ID?NO：1所示。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種載體，它含有所述的多核苷酸。

在另一優(yōu)選例中，所述的載體是pPIC9。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有所述的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述的宿主細胞為真核細胞。更佳地，所述的宿主細胞選自：GS115和/或SMD1168。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種多肽的制備方法，該方法包含：

(a)培養(yǎng)所述的宿主細胞；

(b)從培養(yǎng)物中分離出人內(nèi)皮生長抑制蛋白-8(rhEDI-8t)多肽。