[發(fā)明專利]一種制備單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1制劑的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010141503.2
• 申請日: 2010-04-02
• 公開（公告）號: CN101797261A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂維學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 呂維學(xué)
• 主分類號: A61K31/7032
• 分類號: A61K31/7032;A61P25/00;A61P25/16;A61P9/10
• 代理公司: 煙臺信合專利代理有限公司 37102
• 代理人: 董尚鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)制藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種制備單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1制劑的方法。

背景技術(shù)

神經(jīng)節(jié)苷脂是一類糖脂，具有一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基，其廣泛地存在于哺乳類動物大腦細(xì)胞膜表面和中樞神經(jīng)組織中，已知神經(jīng)節(jié)苷脂對神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的修復(fù)，促進(jìn)神經(jīng)的生長和再生，促進(jìn)神經(jīng)支配功能的恢復(fù)、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞膜等都有積極的作用。

單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂是主要的神經(jīng)節(jié)苷脂之一，可用于很多醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，特別是在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病癥的修復(fù)和治療中，能夠促進(jìn)各種原因引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的神經(jīng)重塑與功能恢復(fù)，對腦脊髓外傷、腦缺血性損傷及帕金森氏病等均具有較好的療效。由于神經(jīng)節(jié)苷脂組分間結(jié)構(gòu)與特性類同，傳統(tǒng)方式中包括用化學(xué)酶的方法來分離、純化脂質(zhì)混合物，并把其它神經(jīng)節(jié)苷脂組分進(jìn)行轉(zhuǎn)化，達(dá)到提取單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的目的，這些方法先前已被證實(shí)在GM1的純度和產(chǎn)率上，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，生產(chǎn)成本高，而且使用大量有害的有機(jī)活劑，特別是在工業(yè)生產(chǎn)的有效性方面還是存在有一些缺陷。為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，中國國家知識產(chǎn)權(quán)局2008年12月24日公開的公開號為CN101328196A的發(fā)明專利申請公布說明書中公開了一種從含有單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂作為主要神經(jīng)節(jié)苷脂組分的脂質(zhì)混合物中分離和提純的方法，該方法主要是使用含有鉀或銫離子的洗脫液通過離子交換柱色譜法分離和微孔尺寸的膜進(jìn)行提純。從該發(fā)明專利申請說明書中可以看到存有以下不足之處：其一是分離、純化工藝過程復(fù)雜，使用酶水解和添加使用許多有害有機(jī)溶劑，不僅難以在工業(yè)上應(yīng)用而且也造成環(huán)境污染；其二是回收溶劑的過程都是采用微孔尺寸為10000到100000道爾頓，優(yōu)選為約50000道爾頓的膜進(jìn)行滲濾，這種滲濾的過程是無壓力自然滲濾，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且效率較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種可減少傳統(tǒng)層析、柱析提純方法及有害有機(jī)溶劑的使用量，在制劑過程中保留神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的生物活性，使制備過程簡單、環(huán)保、成本低且神經(jīng)節(jié)苷脂GM1制劑的療效得到提高的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1制劑的方法。

本發(fā)明的發(fā)明目的是通過實(shí)施如下技術(shù)方案而得以實(shí)現(xiàn)的；一種制備單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1制劑的方法，包括按下述步驟進(jìn)行：

(1)取新鮮豬腦加氯仿、甲醇、水制備GM1混合勻漿液；

(2)將混合勻漿液經(jīng)吊籃式空氣壓濾機(jī)壓濾除去殘?jiān)肎M1初提物；

(3)GM1初提物經(jīng)超濾膜超濾截留分子量為1600道爾頓以上的物質(zhì)，得GM1初純品；

(4)GM1初純品經(jīng)納濾膜納濾去除分子量為1500道爾頓以下的物質(zhì)，得GM1水溶液制劑純品。

為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，上述所述方法的優(yōu)選方案是：

上述所述的GM1水溶液制劑純品經(jīng)冷凍真空干燥，得GM1凍干粉制劑；

上述所述的混合勻漿液是摻入由3～5倍體積的氯仿、甲醇、水的混合溶劑，其勾兌比按1∶1∶0.5～0.8.

上述所述的超濾膜超濾是由能截留分子量為1600道爾頓的卷式超濾膜，采用錯(cuò)流過濾法過濾的；

上述所述的納濾膜納濾是用截留分子量為1500道爾頓以上物質(zhì)的中空纖維進(jìn)行納濾的。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步：其一是本發(fā)明的方法中除在制備GM1混合勻漿液中添加有氯仿、甲醇有機(jī)溶劑外(這是制備過程必須的溶劑，任何方法中均要添加這二種溶劑)，不再添加任何有害的有機(jī)溶劑，而利用機(jī)械物理方法制備GM1純品，完全達(dá)到減少傳統(tǒng)層析、柱析提純方法及有害有機(jī)溶劑的使用量，使制備過程達(dá)到簡單、綠色環(huán)保的標(biāo)準(zhǔn)要求；提高了制備過程的安全性，消除了現(xiàn)有技術(shù)的安全隱患和對環(huán)境的污染。其二是本發(fā)明所述的方法全部通過自制的專用設(shè)備進(jìn)行研制，現(xiàn)已正式投入生產(chǎn)，并且已生產(chǎn)出神經(jīng)節(jié)苷脂的凍干粉制劑，每千克新鮮豬腦組織可獲得純度≥95％的神經(jīng)節(jié)苷脂GM1500mg以上。由于全部生產(chǎn)過程不僅采用高速剪切勻漿，吊籃式空氣壓濾罐壓濾，而且采取錯(cuò)流過濾方式用卷式超濾膜超濾和中空纖維的納濾膜進(jìn)行納濾，整個(gè)所述的方法再不添加任何有害有機(jī)溶劑的前提下進(jìn)行分離、提純，因而使本發(fā)明所述的神經(jīng)節(jié)苷脂GM1保持了原有的生物活性，不對神經(jīng)節(jié)苷脂GM1分子結(jié)構(gòu)作任何修飾，保留其分子的兩親性特征，從而增加了神經(jīng)節(jié)苷脂GM1在體內(nèi)生物膜、血腦屏障的通透性，達(dá)到提高神經(jīng)節(jié)苷脂GM1在神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的臨床修復(fù)和治療效果的目的。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：