[發明專利]甲型流感病毒抗原決定區更換方法

無效

• 申請號: 201010140628.3
• 申請日: 2010-04-06
• 公開（公告）號: CN101857872A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 郭潮潭;沃恩康
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院
• 主分類號: C12N15/44
• 分類號: C12N15/44;C12N15/63;C12N15/09;C12N7/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明屬于生物工程領域，尤其涉及一種甲型流感病毒不同毒株之間HA基因上抗原性片段相互替換的甲型流感病毒抗原決定區更換方法。

背景技術

流行性感冒簡稱流感，被人們認識已有一百余年的歷史，每到秋冬以及冬春季節會就發生流行，成為全球最嚴重的傳染病之一。20世紀發生的幾次全球性大規模流行，造成大量人口死亡，給人類社會帶來深重災難。例如，因1918年的西班牙流感(H1N1)而死亡的人數估計超過5000萬，1957年的亞洲流感(H2N2)和1968年的香港流感(H3N2)也有幾百萬人死亡，該病導致的死亡人數遠遠超過了因戰爭而死亡的人數。2009年，發端于墨西哥的新甲型H1N1流感在全球肆虐。

流感病毒是引起流感的病原體，屬于正黏病毒科單股負義分節段的RNA病毒，根據核蛋白和M蛋白抗原性的不同，分為甲、乙、丙三個型。其中乙型流感病毒抗原性相對穩定，疫苗預防效果顯著，并且普通人群自身攜帶的抗體已具有較好的免疫保護作用。丙型流感病毒抗原性穩定，多為散發病例，不引起流行，危害小。但甲型流感病毒具有極易變異、亞型眾多、傳染性強、宿主范圍廣等特點，是當前最難以控制的傳染病原之一。引起世界范圍大流行的都是甲型流感病毒，近十年來人類感染H5N1、H9N2、H7N7等亞型的禽流感病毒也屬于甲型流感病毒范疇。甲型流感病毒按其表面糖蛋白血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)的抗原性不同，又可分為16個HA亞型和9個NA亞型，并且在HA和NA上存在著多個抗原決定區，如H1亞型的HA蛋白抗原決定區分為Sa、Sb、Ca1、Ca2和Cb，H3亞型病毒的HA蛋白抗原決定區分為A、B、C、D和E。甲型流感病毒抗原性變異分為抗原漂移和抗原轉變兩類?？乖浦钢饾u發生點或局部變異，引起流感的中小規模流行，一般認為抗原漂移使得流感病毒每1～3年出現一次新變種；抗原轉變指大的抗原變異，變異結果會產生新的不同亞型，并且它的改變和病毒的毒力密切相關。由于人群對新的亞型缺乏相應抗體，常常會引起大的流行。因此，亞型眾多的甲型流感病毒及其抗原性極易變異等特點給疫苗研發帶來了巨大困難，常規滅活疫苗不能完全覆蓋隨時變異的流感病毒株，病毒往往能逃逸疫苗的保護作用而引起大流行?，F有的疫苗預防策略呈現一種明顯的滯后狀態，面對新的毒株或新的亞型，原有疫苗無法提供足夠有效的保護，需要在短時間內研發針對性疫苗。隨著分子生物學技術的飛速發展，反向基因操作系統的誕生與不斷完善，使得人們定向改造流感病毒、利用流感病毒為人類服務成為可能。本發明提出了一種流感病毒抗原更換的平臺，通過反向基因操作系統對流感病毒抗原性進行人為改變，在實現開發快速應變能力的流感疫苗，以及以流感病毒為載體的基因治療中具有重大的應用價值。

反向遺傳技術在病毒學研究領域具有重要作用，其中之一就是病毒的拯救和改造。利用反向遺傳技術，人們可以根據需要對病毒進行改造，人為拯救新型病毒，作為病毒載體或疫苗株等來使用。1989年美國科學家首先利用反向基因操作系統并成功獲得經人工重組的流感病毒。1999年Neumann等利用反向基因操作系統在拯救流感病毒方面取得了重大突破，采用的全質粒系統擺脫了輔助病毒的使用。隨著技術的進步，質粒數量由最起先的17個不斷縮減。目前最常用的是8個質粒系統，即RNA聚合酶I/II(Pol?I/II)的雙啟動子載體系統。反向基因操作系統已越來越被廣泛應用，包括流感病毒的分子生物學研究、流感疫苗的研制和流感病毒載體的嘗試等，使得研究開發新型的流感疫苗成為可能。根據流感病毒生物學特性，在其HA、NA和NS基因都可以攜帶外源基因片段，流感病毒作為基因載體在基因治療領域亦得到越來越多的關注。