[發明專利]一種血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒基因及其感染性克隆的構建

無效

• 申請號: 201010140195.1
• 申請日: 2010-03-30
• 公開（公告）號: CN101857873A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 廖明;張賀楠;賴漢漳;曹偉勝;羅開健;徐成剛;辛朝安
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/48
• 分類號: C12N15/48;C12N15/63;C12N7/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒感染性克隆，其特征在于該感染性克隆含有權利要求1所述血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒基因。

3.權利要求2所述血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒感染性克隆的構建方法，其特征在于該方法是采用特異性引物對SEQ?ID?NO：1所示血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒基因進行擴增，并采用pBlueskript?SK(-)為載體，雞胚成纖維細胞為宿主細胞，構建得到所需感染性克隆，所述特異性引物其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2～7所示。

4.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于所述構建方法具體包括如下步驟：

(1)采用核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2～7所示特異性引物將J亞群禽白血病病毒SCAU-HN06株的前病毒全長基因組分成三段進行擴增，并且分別克隆于T載體中，構建質粒命名為pHN-A-T、pHN-B-T和pHN-C-T；

(2)采用EcoRI、KpnI、SalI和NotI這四個酶切位點，將pHN-A-T、pHN-B-T和pHN-C-T經雙酶切、連接和轉化后獲得含有SEQ?ID?NO：1所示J亞群禽白血病病毒基因的重組質粒；

(3)將步驟(2)所得重組質粒和pBlueskript?SK(-)載體分別進行SalI和NotI雙酶切，連接轉化后獲得重組質粒pSK-ALV-HN；

(4)將重組質粒pSK-ALV-HN導入雞胚成纖維細胞中制備得到所需感染性克隆。

5.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于所述步驟(2)中，先將質粒命名為pHN-A-T和pHN-B-T分別進行EcoRI和SalI雙酶切、連接和轉化后得到質粒pHN-(A+B)-T，然后將質粒pHN-(A+B)-T和pHN-C-T分別進行KpnI和NotI雙酶切、連接和轉化后得到含有SEQID?NO：1所示J亞群禽白血病病毒基因的重組質粒。