[發明專利]玉米單倍體胚芽鞘節組織培養的方法及其專用培養基

有效

• 申請號: 201010139732.0
• 申請日: 2010-04-01
• 公開（公告）號: CN101805721A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 李建生;杜何為;劉志鵬;惠國強;嚴建兵;張義榮;鄭艷萍
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種分化培養基，是在MS基本培養液中添加如下物質得到的固體培養基：脯 氨酸、酪蛋白水解物、碳源和凝膠劑；

所述MS基本培養液的溶劑是水、溶質如表1所示；

所述分化培養基中脯氨酸的終濃度是0.6-0.8g/L、酪蛋白水解物的終濃度是 0.4-0.6g/L。

2.根據權利要求1所述的分化培養基，其特征在于：所述凝膠劑是瓊脂粉、卡 拉膠或Gelrite，其中Gelrite在所述分化培養基中的終濃度是3.0g/L；所述碳源是 葡萄糖、麥芽糖或蔗糖，其中蔗糖在所述分化培養基中的終濃度是30g/L。

3.根據權利要求1或2所述的分化培養基，其特征在于：所述凝膠劑是Gelrite； 所述碳源是蔗糖。

4.根據權利要求3所述的分化培養基，其特征在于：所述分化培養基中脯氨酸 和酪蛋白水解物的終濃度分別是：脯氨酸為0.7g/L、酪蛋白水解物為0.5g/L。

5.一種生產玉米單倍體再生植株的方法，包括以下步驟：

1)將單倍體玉米籽粒的成熟胚置于MSVS34培養基中培養，萌發得到胚芽，選 取無色的單倍體胚芽；

所述單倍體玉米籽粒為以玉米單倍體誘導系Stock6作為父本，與農大108進行雜 交得到；

所述MSVS34培養基是在MS基本培養液中添加如下物質得到的培養基：酪蛋白 水解物、2-morpholinoethanesulfonic?acid、氯化鎂、谷氨酰胺、抗壞血酸、毒莠定、 benzyladenine、碳源和凝膠劑；其中酪蛋白水解物的終濃度是0.1g/L， 2-morpholinoethanesulfonic?acid的終濃度是1.95g/L，氯化鎂的終濃度是0.75g/L，谷氨 酰胺的終濃度是0.5g/L，抗壞血酸的終濃度是0.1g/L，毒莠定的終濃度是10mg/L， benzyladenine的終濃度是3mg/L，所述碳源為麥芽糖，所述凝膠劑為瓊脂；所述麥芽 糖的終濃度是40g/L，所述瓊脂的終濃度為8g/L；

2)將上述步驟1)中得到的單倍體胚芽切取胚芽鞘節接種于MSW57愈傷組織誘 導培養基中培養，得到單倍體愈傷組織；

所述培養是在25℃光照培養，光照強度2000lx，每天光照16h，光照培養21d；

所述MSW57愈傷組織誘導培養基是在MS基本培養液中添加鹽酸硫胺素、酪蛋白 氨基酸、脯氨酸、硝酸銀、2，4-D、毒莠定、碳源和凝膠劑得到的培養基；其中鹽酸硫 胺素的終濃度為0.9mg/L，酪蛋白氨基酸的終濃度為0.5g/L，脯氨酸的終濃度為 1.38g/L，硝酸銀的終濃度為3.4mg/L，2，4-D的終濃度為0.5mg/L，毒莠定的終濃度為 2.2mg/L；所述碳源為蔗糖，所述凝膠劑為瓊脂；所述蔗糖的終濃度為30g/L，所述瓊 脂的終濃度為8g/L；

3)將上述步驟2)中得到的單倍體愈傷組織置于權利要求1-4中任一所述的分化 培養基中培養，得到單倍體再生植株；

所述培養的條件是溫度為25℃，放置在2000lx的光照強度下培養，每天光培養 16小時，暗培養8小時。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：在所述步驟2)和步驟3)之間還 包括繼代培養，所述繼代培養是將所述步驟2)中得到的單倍體愈傷組織置于N6繼代 培養基中培養增殖，得到增殖的單倍體愈傷組織；

所述N6繼代培養基是在N6基本培養液中添加酪蛋白水解物、脯氨酸、2，4-D、 碳源和凝膠劑得到的固體培養基；

所述N6基本培養液的溶劑是水、溶質如表2所示；

其中酪蛋白水解物、脯氨酸和2，4-D的終濃度分別是如下：酪蛋白水解物為0.5g/L， 脯氨酸為0.7g/L，2，4-D為1.5-2.5mg/L。