[發(fā)明專利]一種納米微球免疫比濁法檢測α1-微球蛋白的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010139390.2
• 申請日: 2010-03-31
• 公開（公告）號: CN101819207A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王賢理;蒙凱;蔡其浩
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江伊利康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/539;G01N21/31
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 33101
• 代理人: 王洪新

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于測定血清成份的試劑盒，特別是測定血清中的α1-微 球蛋白(α1-MG)的試劑盒，可廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

α_1--微球蛋白(α₁-MG)主要在肝臟和淋巴細(xì)胞組織中合成，廣泛分布于 體液及淋巴細(xì)胞膜表面的一種糖蛋白，分子質(zhì)量27KD，在血液中α₁-微球蛋白 有游離和與IgA結(jié)合等等種形式；正常情況下，血液中游離α₁-微球蛋白可自由 通過腎小球濾過，并在近曲小管被重吸收，因此尿中含量極微。而結(jié)合IgA的 α₁-微球蛋白則不能通過腎小球濾過。由于α₁-微球蛋白的產(chǎn)生量恒定，較少受 腎外因素影響，因此測定α₁-微球蛋白濃度對腎功能損傷具有早期診斷意義。

已知測定α₁-微球蛋白(α₁-MG)的方法有免疫擴(kuò)散法、免疫電泳法、放射 免疫分析法、酶聯(lián)免疫法(ELISA法)，這些方法存在著操作繁瑣，需要特殊的 設(shè)備，樣本需要預(yù)處理，不能進(jìn)行批量樣本分析和不能直接上全自動生化分析 儀檢測等缺點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述背景技術(shù)的不足，提供一種α₁-微球 蛋白檢測試劑的改進(jìn)，所提供的試劑應(yīng)具有樣本無需稀釋、操作簡單、準(zhǔn)確度 高、重復(fù)性好，適用于各種類型的全自動生化分析儀的特點。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：

一種納米微球免疫比濁法檢測α1-微球蛋白的試劑盒，包括試劑R₁、試劑 R₂以及參考校準(zhǔn)品，其中：

a、試劑R₁：一種使樣本中α₁-微球蛋白抗原位點充分暴露，有利于與抗α ₁-微球蛋白抗體試劑充分結(jié)合的α₁-微球蛋白溶液，包括5-200mmol/L緩沖液、 0.5-5mmol/L的穩(wěn)定劑、50-200mmol/L電解質(zhì)、0.1-4mmol/L表面活性劑以及適 量防腐劑，其余為純化水；

b、試劑R2：一種結(jié)合有抗人α1-微球蛋白抗體的納米微球溶液，包括 5-200mmol/L的緩沖液、重量比例0.1％-5％的抗人α₁-MG抗體多克隆抗體和納 米微球、并加入適量防腐劑，納米微球直徑為50-150nm；

c、參考校準(zhǔn)品：一種用來與樣本比較，進(jìn)行結(jié)果計算的α1-微球蛋白溶液， 包括：100-200mmol/L?pH7.0的緩沖液、171-180mmol/L的穩(wěn)定劑、適量防腐 劑以及根據(jù)濃度需要確定量的重組α1-微球蛋白純品，其余為純化水。

α₁-微球蛋白參考校準(zhǔn)品的濃度可以是高濃度單點參考校準(zhǔn)品，在使用時 用生理鹽水稀釋成多個不同濃度的參考校準(zhǔn)品；也可以直接制備成多個不同濃 度的參考校準(zhǔn)品；這里沒有特別的限制，只要制得的α₁-MG參考校準(zhǔn)品能與樣 本比較，能夠測定樣本中α₁-MG的含量即可。

所述α₁-微球蛋白試劑溶液中還加入反應(yīng)促進(jìn)劑PEG-6000，濃度為 3-10mmol/L。

所述結(jié)合有抗人α1-微球蛋白抗體的納米微球溶液的制備方法是：用緩沖 液在室溫下稀釋重量比例為1∶1的抗人α₁-MG抗體多克隆抗體和納米微球， 將兩者混勻后室溫振蕩吸附2小時，加入含0.1％BSA的緩沖液封閉1小時，離 心去上清，再用緩沖液稀釋至濃度為0.3％，并加入適當(dāng)防腐劑。

抗人α₁-MG抗體多克隆抗體和納米微球包括羊抗人α₁-MG抗體多克隆抗體 或兔抗人α₁-MG抗體多克隆抗體或鼠抗人α₁-MG抗體多克隆抗體。

所述穩(wěn)定劑是乙二胺四乙酸二鈉、牛血清白蛋白以及氯化鈉中的一種或多 種的混合。

所述緩沖液是三羥甲基氨基甲烷或CAPSO。

所述防腐劑是廣譜殺菌劑。

本發(fā)明檢測試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)所需主要原料是：