[發(fā)明專利]雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010138158.7
• 申請日: 2010-04-02
• 公開（公告）號: CN101845476A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于洪巍;王博;車大慶;沈文和
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/02
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務(wù)所(普通合伙) 33221
• 代理人: 江助菊

1.一種雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述的方法為以式I所示的N-酰化叔亮氨酸類化合物在雙酶體系下，于水或緩沖溶劑中反應(yīng)制備式II所示的手性L-叔亮氨酸類化合物，所述生物酶為酰化氨基酸消旋酶和水解酶的混合酶，其制備反應(yīng)方程式為：

其中，X＝OH，NH₂，NR₁R₂，OR₃(其中R₁，R₂，R₃＝C₁～C₅直鏈，支鏈，一、二或者三鹵素取代的烷烴)的任一基團(tuán)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述的酰化氨基酸消旋酶為丙氨酸消旋酶Alanine?racemasefrom?Pseudomonas?putida?KT2440；所述水解酶為脂肪酶或酯酶，其中脂肪酶為：Lipase?from?Thermomyces?lanuginosus，Lipase?B?from?Candidaantarctica，Lipase?from?Candide?Rugosa，Lipase?PS“Amano”SD，LipaseAS“Amano”，Lipase?AK“Amano”，Lipase?AYS“Amano”的一種或多種；酯酶為：Esterase?from?Escherichia?coli.K12的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述式I化合物與混合酶的質(zhì)量之比為1∶0.005～0.1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述緩沖溶劑為Tris鹽酸緩沖液、PBS磷酸緩沖溶液或者混合溶液，所述混合溶液為叔丁醇、乙醇、甲醇、丙酮或丁酮與水、Tris鹽酸緩沖液、PBS磷酸緩沖溶液任一種的混合液，體積比為1∶20-1∶2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)溫度為15-60℃，控制反應(yīng)溫度波動幅度為±5℃；所述反應(yīng)的反應(yīng)時間為2-15小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)是以TLC小板跟蹤監(jiān)測反應(yīng)，展開劑是乙酸乙酯與石油醚體積比為1～2∶5的混合試劑；通過監(jiān)測反應(yīng)中新產(chǎn)生的點的濃度和剩下的點的濃度來判斷反應(yīng)終點。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)用液相監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)度，通過監(jiān)測液相色譜中式II化合物的形成和式I化合物的消失來判斷反應(yīng)終點。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)完畢后，用有機(jī)溶劑萃取產(chǎn)物，所使用的有機(jī)溶劑為：乙醚、甲苯、氯苯、乙酸乙酯，異丙醚，正己烷，甲酸乙酯，環(huán)己烷之中的任一種。并且溶劑經(jīng)簡單處理后可以重復(fù)套用。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)體系中所使用的混合酶為酰化氨基酸消旋酶與水解酶的質(zhì)量之比為：1∶3-2∶1；反應(yīng)完畢后，將緩沖溶液的pH值調(diào)節(jié)到前相同值，酶體系可重復(fù)使用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙酶體系制備L-叔亮氨酸類化合物的方法，其特征在于：所述反應(yīng)的是按照以下步驟進(jìn)行：

a.將化合物I投放到水溶液中，然后加入助溶劑。再加入按照一定比例組成雙酶制劑。于搖床中或者動力攪拌裝置中充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)。

b.按照化合物I：酶制劑，質(zhì)量之比為1∶0.005～0.1進(jìn)行投料。

c.控制溫度于15～60℃進(jìn)行反應(yīng)，期間用TLC硅膠板或液相色譜進(jìn)行跟蹤監(jiān)測，直至反應(yīng)基本進(jìn)行完畢；反應(yīng)完畢，用有機(jī)溶劑萃取反應(yīng)液。然后減壓除去有機(jī)溶劑，即可得到粗化合物II。

d.將反應(yīng)溶液調(diào)節(jié)pH值于一定的值，可重復(fù)利用該反應(yīng)溶液。