[發明專利]一種X-STR基因座熒光標記復合擴增體系及其應用

無效

• 申請號: 201010136373.3
• 申請日: 2010-03-26
• 公開（公告）號: CN101787396A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 劉秋玲;趙虎;呂德堅
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及檢測人體基因組中具有多態性的遺傳標記，尤其涉及 X染色體遺傳標記技術，具體涉及一種X-STR基因座熒光標記復合擴 增體系及其應用。

背景技術

短串聯重復序列(short?tandem?repeats，簡稱STR)是由2～7個堿 基對作為核心單位，串聯重復形成的一類微衛星DNA序列，其片段 可采用PCR技術擴增。STR主要由于核心重復單位數目的變化形成了 STR基因位點的遺傳多態性，其等位基因可用銀染、熒光標記和放射 自顯影等技術分型。人類基因組中，平均每6～10kb就存在有一個STR 基因位點，為法醫個人識別和親子鑒定提供了高信息基因位點的豐富 來源。

X染色體是人類性染色體，X染色體短串聯重復(X-chromosomal? Short?Tandem?Repeat，X-STR)是性染色體上一類多態性遺傳標記， 男性的X-STR以單倍型形式存在只能從其母親中得到，且只能遺傳給 女兒，因此同父所生的姐妹在X-STR基因座上有1個相同的等位基因， 孫女X-STR基因座有1個等位基因與其祖母相同。X染色體這種獨特的 遺傳方式，使得X-STR在親緣鑒定中有特殊的應用價值。

在親緣鑒定中，有些沒有父母雙親參與檢測的特殊案件，如：姐 妹認親、同父異母的半同胞姐妹認親、隔代認親(祖母-孫女)等， 用常染色體、Y染色體或線粒體的遺傳標記無法排除或認定，此時只 有依靠X染色體STR才能起到直接排除或認定的作用。

此外在有先天性缺陷的遺傳病中，可通過檢測X染色體STR來 診斷有無X染色體多倍體、X染色體重復、X-STR重復序列長短等， 同時，X染色體STR檢測可應用于X連鎖遺傳病、X染色體單親二 倍體、X染色體失活的親源性等鑒定。從而為伴X染色體遺傳病提 供產前診斷方法。

因此，可以通過分析X染色體上的STR基因座的等位基因分型 來確定親緣關系和用于伴X染色體遺傳病的產前診斷。

X染色體STR位點廣泛存在真核細胞基因組中，高度穩定且具有 較高的遺傳多態性，然而與常染色體和Y染色體STR相比，迄今發現 和應用的X-STR位點數量較少，群體分布、突變率、連鎖平衡、基因 結構等方面的信息尚不夠豐富，在法醫學、醫學等領域的應用受限， 遠不及其他DNA遺傳標記廣泛。

X染色體遺傳標記的研究在國內還處于初期，目前國際上商品化 檢測試劑盒僅有德國Argus?X-8和Argus?X-12，該類試劑盒 在法醫學應用實踐中存在以下問題：

(1)采用這類試劑盒需要增加遺傳標記時遇到困難；

(2)這些X-STR基因位點都是基于中國群體以外的群體(主要 是白人群體)資料而開發的，其中有些基因位點，在中國群體的基因 頻率分布較差，個人識別能力較低；

(3)國外商品化試劑盒價格昂貴。

這些缺點限制了X染色體遺傳標記在國內的應用，不利于進一步 在基層推廣。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種適合于中國人 群的，可以快速、方便針對常染色體STR、Y-STR難以排除或認定親 緣關系的特殊檢案(姐妹認親、同父異母的半同胸姐妹認親、隔代認 親等)進行鑒定的X-STR基因座熒光標記復合擴增體系。

本發明的另一個目的在于提供上述X-STR基因座熒光標記復合 擴增體系在為伴X連鎖遺傳病、X染色體單親二倍體、X染色體失 活的親源性鑒定等提供產前診斷，以及姐妹認親、同父異母的半姐妹 認親、隔代認親等親緣鑒定中的應用。

本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的：

一種X-STR基因座熒光標記復合擴增體系，該復合擴增體系共包 含14個基因座：DXS7133、DXS6801、DXS981、DXS6809、DXS7424、 DXS6789、DXS9898、DXS7132、GATA165B12、DXS101、DXS10075、 GATA31E08、DXS10074和DXS10079。

本發明對上述14個X-STR基因座進行了研究，表明這14個基因座 在中國人群中有高度的遺傳多態性和良好的等位基因頻率分布。

一、本發明復合擴增體系中14個基因座的選擇

(1)位于同一連鎖群內