[發(fā)明專利]一種植物三磷酸甘油醛脫氫酶基因及制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010136281.5
• 申請(qǐng)日: 2010-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN101831448A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張秀紅;饒曉蘭;呂應(yīng)堂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/53
• 分類號(hào): C12N15/53;C12N15/10;C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種分離的三磷酸甘油醛脫氫酶基因，其序列為SEQ?ID?NO：4所示核苷酸序列。

2.權(quán)利要求1所述一種植物三磷酸甘油醛脫氫酶基因的制備方法，該方法包括以下步驟：

A、利用PCR技術(shù)，以水稻兩周幼苗總cDNA為模板，并根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)提供的基因的cDNA序列設(shè)計(jì)一對(duì)包含了該基因全長(zhǎng)ORF的特異引物，以B-Taq為DNA聚合酶PCR擴(kuò)增，94℃3min，94℃30s，55℃30s，72℃1min，30cycles，72℃10min，產(chǎn)物電泳并切膠回收，獲得包含該水稻三磷酸甘油醛脫氫酶基因的全長(zhǎng)開放閱讀框的cDNA序列；

B、將(A)步驟獲得的基因片段連接到中間載體PBS-TII中，測(cè)序驗(yàn)證，獲得堿基序列完全正確的水稻三磷酸甘油醛脫氫酶基因的全長(zhǎng)片段；

C、將(B)步驗(yàn)證獲得的正確的基因片斷連接到改造獲得的載體pUbiO中，使水稻三磷酸甘油醛脫氫酶基因置于玉米泛素啟動(dòng)子和NOS尾巴之間，形成轉(zhuǎn)化或表達(dá)的載體；

D、將制備獲得的含有目的基因的過量表達(dá)載體pUbiO轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105，導(dǎo)入成熟胚誘導(dǎo)的水稻愈傷組織中，并經(jīng)過再分化終獲得過量表達(dá)該基因的水稻轉(zhuǎn)基因植株。

3.權(quán)利要求1中所示的一種三磷酸甘油醛脫氫酶基因在水稻抗逆中的應(yīng)用。