[發(fā)明專利]低血球溶解性的抗微生物肽、藥物組合物及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010134436.1
• 申請日: 2010-03-29
• 公開（公告）號: CN102206250B
• 公開（公告）日: 2017-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程家維;黃國群;鄭錫聰;游輝元
• 申請（專利權(quán)）人: 翔升科技股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K7/06;C07K7/64;A61K38/08;A61K38/10;A61K38/12;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/12;A61P33/02
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所11308
• 代理人: 秦力軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明系關(guān)于一種多肽，特別是關(guān)于一種抗微生物肽。

背景技術(shù)

由于對傳統(tǒng)抗生素產(chǎn)生抗藥性菌株的出現(xiàn)，促使了新治療試劑的研究，包括許多動物性來源的抗菌肽。目前這些抗菌肽已被發(fā)現(xiàn)在一些宿主與生俱來的防御機制中扮演著相當(dāng)重要的角色。包括植物、昆蟲、兩生類和哺乳動物中，可能都具有抗菌肽，該抗菌肽的抗生素特性可去對抗細菌、真菌，甚至一些病毒。此類抗菌肽會與脂質(zhì)結(jié)合(大于百分之九十五)，可迅速地分離脂雙層而破壞了膜的完整性。另一方面，也能夠在細菌平行的脂雙層上增加小而短暫的傳導(dǎo)，使得細胞質(zhì)膜部分去極化而破壞原本的電位梯度。

此類抗菌肽在宿主防御的保護功用，在果蠅實驗已被證實；當(dāng)果蠅被微生物感染后，若抗菌肽的表現(xiàn)量減少，則會大大降低其存活率。而在哺乳動物中，肺囊胞性纖維癥病人和小鼠的缺陷性細菌致死(defective?bacterial?killing)也可證實此類抗菌勝肽在宿主防御的保護功能。

在哺乳動物中所發(fā)現(xiàn)的抗菌勝肽可被分類為富含半胱氨酸的防御素(α、β防御素)和多樣的卡色力西丁(cathelicidin)類。卡色力西丁類含有一段高度保留的訊號序列和前區(qū)域卡色林(cathelin)，及位于C端區(qū)塊具變異性的抗菌序列。許多卡色力西丁在帶負電的卡色林區(qū)塊和帶正電的C端區(qū)塊之間含有獨特的彈性蛋白酵素切割作用位；此作用位的蛋白質(zhì)水解反應(yīng)在牛或豬的嗜中性淋巴球中都已被觀察到且為抗菌活性所必須。根據(jù)氨基酸成分及構(gòu)造，卡色力西丁家族可再分類為三群：第一群具有親水脂的α-螺旋勝肽，比如LL-37、CRAMP、SMAP-29、PMAP-37，、BMAP-27和BMAP-28；第二類則是富含精氨酸/脯氨酸或色氨酸勝肽，如Bac5，Bac7，PR-39和吲哚力西丁(indolicidin)；第三群則為含半胱氨酸勝肽，如波地金(protegrins)。雖然這些抗菌勝肽皆具有廣泛的抗菌效力，然而卻對紅血球有不同的溶血活性，因此大幅限制其治療的潛力。因此，本發(fā)明提供一種低血球溶解性的抗微生物肽，該抗微生物肽不但具有良好的抗菌活性，同時兼具有低血球溶解性的特點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題

因為抗菌肽通常具有低分子量(＜5kDa)、具有廣泛的活性及為宿主的防御系統(tǒng)中對抗微生物感染重要的一環(huán)等特性，因此可作為設(shè)計低分子量抗菌復(fù)合物的起始點。再者也因其兼具有疏水性和帶電性區(qū)域，使其具有可折迭成親水脂結(jié)構(gòu)的潛力，此特性也關(guān)乎其水解細胞質(zhì)膜的能力。不過，雖然都具有廣泛的抗菌效力，這些抗菌肽對于紅血球卻有不同的溶血活性，因此限制其治療的潛力。

因此，本發(fā)明的目的之一是提供一種低血球溶解性的抗微生物肽；本發(fā)明的另一目的是提供一種包含上述抗微生物肽的藥物組合物；本發(fā)明的又一目的是提供一種利用上述抗微生物肽用于抗微生物的用途。

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)的問題所采用的技術(shù)手段為一種低血球溶解性的抗微生物肽，具有如下所示的氨基酸序列：(P₁)_M(A₁X₁X₂)_N(P₂)_X；其中，P₁為堿性氨基酸，包括選自精氨酸(Arg)、賴氨酸(Lys)的一種或多種；A₁為芳香族氨基酸或丙氨酸，包括選自色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)的一種或多種；X₁為堿性氨基酸或非極性氨基酸，包括選自精氨酸(Arg)、賴氨酸(Lys)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)、異亮氨酸(Ile)的一種或多種；X₂系為堿性氨基酸或非極性氨基酸，包括選自精氨酸(Arg)、賴氨酸(Lys)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)、異亮氨酸(Ile)中的一種或多種；P₂系為堿性氨基酸，包括選自由精氨酸(Arg)、賴氨酸(Lys)的一種或兩種，且M、X分別為0～2；N的數(shù)目為2～4；當(dāng)N＞2時，其中A₁可為丙氨酸(Ala)，該丙氨酸(Ala)的數(shù)目不超過(N-2)個。

根據(jù)對初級及二級結(jié)構(gòu)的修飾，設(shè)計出具有抗臨床上重要菌株活性的肽，并了解此類肽構(gòu)造上的一些重要特征，改善天然抗菌肽的活性或是毒性。此類抗菌肽是用途廣泛的新型抗菌肽，富含色氨酸序列，可應(yīng)用于抗生素的制作，兼具抗菌活性和低溶血的特性，是為廣泛性地抗革蘭氏陽性、陰性菌、原生動物、真菌和具封套的人類自體免疫缺失病毒而設(shè)計的抗菌肽。