[發明專利]一種低糖鏈高活性的新茶皂甙及其生物轉化方法

無效

• 申請號: 201010133859.1
• 申請日: 2010-03-25
• 公開（公告）號: CN101824059A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 田晶;徐龍權;翟濱;趙森
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C07H15/256
• 分類號: C07H15/256;C07J63/00;C12P33/12;A61P39/06;C12R1/685
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 畢進

1.一種低糖鏈高活性的新茶皂甙，其特征在于具有下述通式：

其中，取代基R代表半乳糖醛酸基、半乳糖基或氫，R1代表當歸酸基或氫，R2代表氫或乙酰基，R3代表乙酰基或氫。

2.根據權利要求1所述的一種低糖鏈高活性的新茶皂甙，其特征在于化學名稱為3-氧-[β-D-吡喃半乳糖醛酸基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-21-當歸酸基-28-乙酰基-茶皂甙元A，分子量為981，分子式為C₄₉O₂₂H₇₃，結構式為：

3.根據權利要求1所述的一種低糖鏈高活性的新茶皂甙，其特征在于化學名稱為3-氧-[-β-D-吡喃半乳糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-21-當歸酸基-28-乙酰基-茶皂甙元A，分子量為967，分子式為C₄₉O₁₉H₇₅，結構式為：

4.根據權利要求1所述的一種低糖鏈高活性的新茶皂甙，其特征在于化學名稱為3-氧-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-22-乙酰基-茶皂甙元A，分子量為724，分子式為C₃₈H₆₀O₁₃，其結構為：

5.權利要求1所述的一種低糖鏈高活性的新茶皂甙的生物轉化方法，其特征在于通過下述步驟完成：

第一步、利用AB-8大孔樹脂對脫脂粗茶皂甙的純化：

取一定量脫脂粗茶皂甙，用95％乙醇溶液浸泡，過濾得清液，蒸出酒精，得到油茶皂甙的清液，清液上柱，靜置使充分吸咐，用1.5BV去離子水沖洗，配制0.1％NaOH，以1.5BV/h速度沖洗，并用去離子水洗至中性，用80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液，減壓濃縮至干；

第二步、培養黑曲霉sp.48s菌，提取粗酶液：

將豆粕攪碎，過20目篩，分別稱取豆粕和麥麩，使二者的重量比為1∶3，放入錐形瓶中，加入自來水使濕潤，攪拌均勻，在121℃下滅菌15～20分鐘，待冷卻后，接菌，于30℃下培養2～3天，待擴配菌種長出大量孢子，向培養基中加入0.02mol/L?pH值為5.0的NaAc-HAc緩沖液，緩沖液為前述自來水的5倍，浸泡1～2小時，用紗布過濾，濾液在9000轉/分轉速下離心15分鐘，除去其中部分雜質，即得到粗酶液，在粗酶液中緩慢加入無水乙醇，使乙醇濃度為70％～75％，于2～8℃放置過夜，進行鹽析，鹽析后的酶液在9000轉/分轉速下離心15分鐘，將沉淀用1mL上述緩沖液洗下，置于透析袋中用醋酸緩沖液于2～8℃透析24小時，之后再離心，所得上清液即為酶液；

第三步、茶皂甙的酶解：

取一定量5mg/ml的茶皂甙底物溶液和等體積的酶液，混勻后，pH值為6.0，50℃反應16小時，反應終止時，向反應體系中加入2倍體積的茶皂甙底物量的水飽合正丁醇搖晃多次，靜置分層后，取上層液TLC點樣，展開，10％硫酸顯色后，分析酶反應結果；

第四步、酶解組分的分離：

采用1mm厚層析板，按照薄層層析的方法和要求分離酶解組分，展開劑是：氯仿∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5，得到新皂甙單體，用刀片刮下后用適量甲醇溶解，用濾紙過濾后的液體用旋轉蒸發器蒸發濃縮；得到酶解后的皂甙單體，用于HPLC-MS/MS分析；

樣品膠的制備：稱取一定量茶皂甙酶解產物放入瓷碗中，加入適量甲醇溶解，再加入氯仿和硅膠，攪拌均勻，置水浴鍋上加熱，待溶劑揮發凈后即制得樣品膠；

硅膠柱的預處理：在硅膠柱中加入適量300～400目的硅膠，保持上表面水平，抽真空使之細密均勻，再裝入干燥好的樣品膠；

梯度洗脫茶皂甙：硅膠柱裝好后，先用純氯仿通柱，再依次按氯仿∶甲醇＝9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5梯度洗脫茶皂甙，分別收集，即可得到茶皂甙純品。

6.根據權利要求5所述的一種低糖鏈高活性的新茶皂甙的生物轉化方法，其特征在于第一步中脫脂粗茶皂甙用95％乙醇溶液浸泡，0.1％NaOH，以1.5BV/h速度沖洗，用80％乙醇洗脫。